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第三章 方法学选择与评价 1.什么是方法学评价？一般包括？ 答：方法学评价是通过实验室途径测定分析方法的技术性能，并评价其是否可接受，其目的在于明确该是否具有足够的方法性能来说明检测系统的可靠性及可以满足临床需求。 一般包括 ：准确度、精确度、检测限、生物参考区间、可报告范围等。 2.实验方法的分级？3个方法各自的定义？用途？ 答： = 1 \* GB2 ⑴决定性方法：是准确度最高系统误差最小、经过研究证明尚未发现其不准确度或不精密度的方法，其测量结果与“真值”最为接近，因此具有权威性。这类方法主要用于评价参考方法和对一级标准品进行定值，而不直接用于鉴定常规方法。 = 2 \* GB2 ⑵参考方法：是准确度和精确度已经充分证实，干扰因素少，系统误差与重复测定的随机误差相比可以忽略不计，有适当的灵敏度、特异性及较宽的分析范围。这类方法主要用于鉴定常规方法，也用于二级参考物和质控血清定值，或用于商品试剂盒的质量评价等。 = 3 \* GB2 ⑶常规方法：指性能指标符合临床需求，有足够的精密度、准确度、特异性和适当的分析范围，经济实用的临床常规检验方法。 3.什么是参考物？分类？各自的用途？ 答：参考物也称标准品或标准物质，它的一种或几种物理或化学成分已经充分确定，可用于校准仪器、评价测定方法或给其他物质定值的物质。 分类：①一级参考物：是含量确定的稳定而均一的物质，它的数值已由决定性方法或由高度准确的若干方法确定。用于矫正决定性方法，评价及校正参考方法以及为“二级参考物”定值，一级参考物均有证书。 ②二级参考物：是纯溶液（水或有机溶剂）或某种特殊基质的纯溶液。这类参考物可有实验室自己配置或为商品，其物质的量有参考方法定值或用一级参考物比较而确定。主要用于常规方法的标化或为控制物定值。 ③校准物：有冻干品或溶液，可以用一级或二级参考物以参考方法定值。用于对常规方法和仪器的校准。④控制物：即质控品，具有与检测过程相适应的特征，其成分及基质与检测的样本相同或相似，且均一、稳定。用于常规质量监控。 4.方法选择的原则？ 答： = 1 \* GB2 ⑴实用性：一般应具备样本用量少、分析速度快或可同时进行多项目和多样本的分析；方法操作简便、试剂种类少、易于实现自动化、操作人员无需特殊培训等；安全可靠、试剂无毒、无需特殊防护措施；试剂价格低廉，无需昂贵的试剂和设备。 = 2 \* GB2 ⑵可靠性：应具有较高的精密度和准确度，以及较宽的检测范围。精密度即变异系数（CV%）一般应小于5%。准确度是指测定值与“真值”的符合程度，一般偏差系数（CB）应小于5%。特异性是指与待测物质起化学反应，不与其他结构类似的化合物发生反应。检测能力用检测限度或“检出限”衡量。检测限通常是指能与适当的“空白”读数相区别的，检测系统可以检出的待测物的最小量。 5.方法选择与评价的基本步骤？ 答： = 1 \* GB2 ⑴提出要求：为了满足临床建立新的检测方法or对原来的实验方法进行改造。 = 2 \* GB2 ⑵收集资料：查阅文献，参考资料，要求相关公司提供资料。 = 3 \* GB2 ⑶确定候选方法：①检测方法的原理、原始参考资料以及仪器试剂供应保障。②试剂和参考物质的成分、包装量、开瓶前后的保存条件、稳定性（eg有效期）等。③是否符合生物安全的要求，可能产生的危害，安全防范措施及应急预案。④样本的要求、采样条件、样本量、抗凝剂、防腐剂和必要的保存条件等。⑤准确度、精密度、灵敏度、特异性和参考区间等的初步评价。⑥建立试验方法的标准化操作规程，即SOP文件。⑦试验所用的设备、设施等要求，以及方法的局限性。⑧可以获得的服务与技术支持。 = 4 \* GB2 ⑷候选方法的初步评价：①标准曲线的线性范围及重复性。②质控血清和新鲜标本的重复性试验，以初步考查方法的精确度。③分析不同浓度的标本，并与公认的参考方法比对，以初步考查方法的准确度。④仪器和商品化试剂符合国家有关规定的证明。 6.定性实验的方法学评价有哪些？ 答：重复性研究和方法学比较。 7.定性实验重复性研究具体步骤？ 答： = 1 \* GB2 ⑴确定方法的临界值：同一份样本，在多次重复实验中各有50%的几率获得阳性或阴性结果时该分析物的浓度。 = 2 \* GB2 ⑵在临界值基础上准备出±20%的浓度样本。 = 3 \* GB2 ⑶对以上样本分别测定20次，记录阳性和阴性结果数。 = 4 \* GB2 ⑷当实验结果表明“临界值”样本的阴性结果和阳性结果不是各占50%时，原因可能是：被评估的临界值浓度不准确、结果数据不充分、方法学剂量反应曲线在临界值处是非线性的。 = 5 \* GB2 ⑸当实验结果表明+