DB45∕T 2138-2020 水体中诺如病毒的核酸检测方法 实时荧光RT-PCR法(广西壮族自治区).pdf

ICS 11.020 C 51 DB45 ξÁ 自 广西壮族 区地方标准 J 曰 DB45/T 2138一一2020 水体中诺如病毒的核酸检测方法 实时荧光 RT-PCR 法 Detection ofnorovirus nucleotide acid in water- Real-time RT-PCR 2020 - 07 - 24 发布 2020 - 08 - 20 实施 广西壮族自治区市场监督管理局 发布 DB45/T 2138--2020 目IJ 1==1 本标准按照GB/T 1. 1-2009给出的规则起草。 本标准由广西壮族自治区卫生健康委员会提出并宣贯。 本标准由广西壮族自治区卫生技术标准委员会归口。 本标准起草单位:广西壮族自治区疾病预防控制中心。 本标准主要起草人:文Ij巍、邓丽丽、 i罩冬梅、马宇燕、钟革、李秀桂。 水体中诺如病毒的核酸检测方法 实时荧光盯一PCR 法 1 范围 本标准规定了水体中诺如病毒的实时荧光盯-PCR检测方法。 本标准适用于f西区域内地表水、地F水、集中式供水、娱乐用水、污水等水体中基因 I 组和基因 II 组诺如病毒的检测。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文11 i-o~ 2. 1 Norovirus 2.3 川门111 也J ~ fE Ct 值 Cycle t hre shold value … 每个PCR反应管内荧光信号到达设定的域l植时所经历的循环数。各模板的Ct值与该模板的起始拷贝 数的对数存在线性关系， 起始拷贝数挡在， C时直越小ρ 反之亦然。 3 原理 』黎圣 水样在通过带负离子泪合纤维素膜时，带正离子的病毒被吸问1;JîU膜J上，然后再洗脱病毒，并用聚乙 ~ :~ , :J~- ; , 二醇沉淀病毒达到富集浓缩的效果。 古用实时荧光RT-PCR技味， 针对诺如病毒衣壳蛋白区N/S区设计特 异性号|物和探针，荧光探针的5 端标记报告荧光基团， 3 端标记;卒灭荧光基团，当探针完整时，报告 荧光基团的发射波长被评灭荧光基团的激发波长吸收;当PCR扩增时， Taq酶的5 →3 端外切酶活性将 探针酶切水解，报告荧光不再受碎灭荧光的影响，使荧光监测系统收集到报告基团的荧光信号，即每扩 增一条DNA链，可产生一个报告基团的荧光信号，实现荧光信号积累与PCR产物形成同步。 4 试剂和耗材 4.1 试剂 4. 1. 1 除另有说明外，本文件所使用的试剂均为分析纯，分子生物学试剂所用水为无RNA 酶的水。 D845/T 2038--2020 4. 1.2 2.5 mol/L 氧化娱 (MgC12 ) 溶液，配制温照附录A 中的 A. 1 执行。 4.1.3 3%牛肉浸膏洗脱液，配制温照附录A 中的 A. 2 执行。 4. 1.4 16%PEG8000 溶液，配制温照附录A 中的 A.3 执行。 4. 1.5 0.2 mol/L 的 Na二HP0 溶液，配制边照附录 A.4 执行。 A 中的 4 4