【代码M0701】荧光原位杂交（FISH）探针的制备.docxVIP

【代码M0701】荧光原位杂交（FISH）探针的制备 2015-10-09实验管家 实验管家 实验原理 染色体荧光原位杂交始于传统的细胞遗传学和DNA技术的结合，这种结合开创了一门新的学科——分子细胞遗传学。其基础是Southern blot原理，以半抗原如生物素、地高辛间接标记或以荧光素直接标记的已知核酸分子为探针，探针和靶序列双链DNA变性后杂交，互补的异源单链DNA分子在适宜的温度和离子强度下退火形成稳定的异源双链DNA，通过荧光标记的亲和素或抗地高辛抗体将半抗原显示出来，通过荧光显微镜观察杂交信号。FISH具有快速灵敏、特异性好的特点，可同时分析分裂期和间期的多个细胞，并进行定量；可以检测隐匿或微小的染色体畸变以及复杂核型；还可以使用多种荧光标记，显示DNA片段及基因之间的相对位置与方向，空间定位精确。  实验步骤 第一天缺口平移标记探针1.?试剂准备1）?0.1mmol/L dNTP0.3mmol/L dATP、0.3mmol/L dCTP和0.3mmol/L dGTP等体积混合。2）?0.1mmol/L dTTP1倍体积的0.3mmol/L dTTP和2倍体积的三蒸水混合。2.?缺口平移体系和反应条件0.1mmol/L dTTP 6.5μl0.1mmol/L dNTP 10μl10× Nick Translation buffer 5μl1