植物组织培养技术第七章植物脱毒快繁技术 .pptx

第七章 植物脱毒快繁技术 ;;; 目前，对细菌和真菌侵染的病害，可通过药物处理达到治愈的目的。但还没有治病毒的特效药。种子一般不带病毒，种子繁殖可得无毒植株。但对于无性繁殖植物，必须采取一些特殊方法脱除病毒。;; ;;; 依据病毒对高温的敏感，寄主耐高温。利用这一差异，选择适当的温度和处理时间，进行高温处理，就能使寄主体内病毒浓度降低，传递速度减慢或失去活性，而寄主细胞仍然存活，并加快分裂和生长。;(1)温汤浸渍处理 ; （1）. 温汤浸渍处理 适用：休眠器官、剪下???接穗或种植的材料 方法：50℃左右的温水中浸渍10min至数小时 特点：方法简便易行，但易使材料受伤。 ;;　　热处理广泛应用于葡萄、草莓、马铃薯和菊花等植物。如：葡萄置于38 ℃可去除扇叶病毒。 　　热处理对葡萄扇叶病毒、草莓斑驳病毒、苹果花叶病毒等球形病毒有作用，而对另一些病毒不起作用，因此，必须与茎尖培养相结合脱毒效果更好。;;;1、茎尖培养脱毒原理 ; 植物的去病毒技术，实质上就是采取不含病毒颗粒或病毒颗粒含量甚少的0.1～0.5mm 带1～2个叶原基的茎尖作为外植体，进行微繁殖，使其培养成完整的无病毒小植株的技术。; 1、茎尖培养脱毒原理?? 病毒在植物体内分布不均匀，其数量随植株部位及年龄而异，越靠近茎顶端区域，病毒感染的程度越低，生长点即分生组织（约0.1-1mm）几乎不含或含病毒很少。 ; 1、植物体病毒的移动主要靠2条途径：一是通过维管系统，而分生组织中尚未形成维管系统；二是通过胞间连丝，但这条途径病毒移动速度非常慢，赶不上茎尖和根尖细胞不断分裂和活跃的生长速度。 2、当植物细胞分裂DNA复制时，病毒DNA随着复制。因此，植物细胞分裂和病毒繁殖之间存在相互竞争。在旺盛分裂的分生组织中，代谢活动很高，正常核蛋白合成占优势，使病毒无法进行复制。 3、茎尖中存在高水平内源激素，可抑制病毒的增殖。 4、在植物体内存在有一种“病毒钝化系统”，在分生组织中的活性最高，因而使分生组织不受侵染。 ;2、培养基??? 一般以White、MS为基本培养基，提高钾盐和铵盐含量有利于茎尖生长。MS培养某些植物茎尖时，有些离子浓度过高应稀释。 　　在双子叶植物中，激素可能在第2对叶原基中合成，所以茎尖的圆锥组织生长激素不能自给，必须加入生长素与细胞分裂素，浓度要合适。在生长素中应避免用易促进愈伤组织化的2，4-D，宜用NAA或IBA；细胞分裂素用KT或BA；GA3对某些植物茎尖培养有用。;3、茎尖的培养方法??? 需要一台解剖镜（8-40倍）。 剥离茎尖要迅速并尽快接种，或在一个衬有无菌湿滤纸的培养皿内进行操作，以防茎尖变干。 茎尖分生组织由于有彼此重叠的叶原基的严密保护，只要仔细解剖，(无须表面消毒)就可得到无菌的外植体。有时消毒处理会增加培养物的污染率。 　　即：叶片包被严紧的芽，如菊花、兰花，只须75%酒精中浸蘸一下，而叶片包被松散的芽，如香石竹、马铃薯等，则要用0.1%次氯酸钠表面消毒10min。;;;;The Apical Meristem; 剥取茎尖过程: 解剖镜下用解剖针将叶片剥掉，解剖针要常消毒。当一个半圆球的顶端分生组织充分暴露出来之后，用解剖刀片将带1-2个叶原基的分生组织切下，接到培养基上。??? 将接种的茎尖置于22℃左右温度下。 2000-3000lx 16h/d 光照下培养。由于在低温和短日照下，茎尖有可能进入休眠；所以较高的温度和充足的日照时间必须保证。微茎尖需数月才能成功。; 茎尖培养的继代培养和生根培养和一般器官的培养相同。 茎尖培养脱毒，由于其脱毒效果好，后代稳定，所以是目前培育无病毒苗最广泛和最重要的一个途径。;4、影响微茎尖成活及脱毒的因素?? （1）母体材料病毒侵染程度 被单一病毒感染的植株脱毒较容易，复合感染的较难。 （2）外植体大小?? 在最适培养条件下，外植体的大小决定茎尖的存活率，外植体越大，产生再生植株的机会也就越多。除了外植体的大小之外，叶原基的存在与否也影响分生组织形成植株的能力，一般认为，叶原基能向分生组织提供生长和分化所必需的生长素和细胞分裂素。;（2）培养条件 在茎尖培养中，光下培养的效果通常比暗培养效果好，如马铃薯茎尖培养时，当茎已长到1cm高时，光照强度便增加到4000lx。 （3）外植体的生理状态? 茎尖最好要由活跃生长的芽上切取。?? 取芽的时间也很重要，一般选萌动期较好。否则采用适当的处理，打破休眠才能进行。 ;