实验室做细胞常用染色.pptxVIP

实验室做细胞常用的细胞固定与染色方法 一、爬片前盖玻片处理方法 对于悬浮培养的细胞，在进行各种染色前常需先制备成涂片。为了保证细 胞在长时间的染色过程中不从载玻片脱落，必须使其牢固贴附于载玻片上。在 载玻片上涂布一层有助于细胞黏附的物质是经常采用的方法之一。 能促进细胞 黏附的物质主要有多聚赖氨酸、铬矾明胶等，这里介绍多聚赖氨酸的涂布方 法。 1、将载玻片用玻璃专用洗涤剂(如 Decon)浸泡 5min，间或振荡。 2、用自来水冲洗 5min。 3、以 1％盐酸—70％乙醇溶液浸泡 5min。 4、烤箱干燥(至此即可用于普通染色)。 5、多聚 L-赖氨酸(1:10 溶于去离子水)浸泡 5min，振荡。 6、入 60℃烤箱 1 h，或室温过夜干燥(用于细胞化学、免疫细胞化学及原 位杂交细胞化学)。 二、细胞固定常用方法 固定细胞的目的在于把组织和细胞的原有结构尽可能完整地保存下来，避 免组织和细胞发生降解、自溶、腐败和变形等，使细胞和组织内的各种酶失去 活性，防止细胞和组织的各种分子变性、解离，使细胞的化学物质和酶能准确 定位，并在以后的处理和制片过程中亦不发生改变和破坏。同时，固定还可使 细胞的各部分易于着色，适于观察、长期保存和分析。 固定组织、细胞的基本原则：尽可能选用新鲜培养物；根据检测工具、 对象、目的和要求选择固定剂和固定方法。 培养物的准备和固定前处理：各种细胞培养物，