2020急性经口毒性实验.pptVIP

急性经口毒性实验 （ Acute Oral Toxicity Test ） 一、实验目的： ? （一）通过本次实验 掌握经口灌胃技术 ，半 数致死剂量的意义。 ? （二）通过本次实验 学习半数致死剂量的计 算及毒性判定 。 二、测定方法： ? 本实验以灌胃方式测定敌敌畏 DDV （ 80g/100ml ） 的半数致死量 （ LD 50 ）。 （一）实验动物与分组： ? 首选健康成年小鼠 (18g ～ 25g) 和大鼠 (180g ～ 220g) 。 ? 实验前动物要在实验环境中适应 3 ～ 5 d 时 间，以了解其正常活动情况和健康状况，并 淘汰不健康或体重不符合要求的动物 。 ? 本次实验取体重 18-25 g 的小鼠，实验时， 将小鼠 称体重、编号、按随机分组原则，将 实验动物分成 5 组，每组 8 只 。 （二）剂量选择： ? 首先查阅与受试化学物结构及理化性质相近似 的化学物的 LD 50 ，以此值作为受试化学物的预 期毒性中值，即 中间剂量组 ，再上下各推 1-2 个剂量组，进行预实验。 ? 各剂量组的间距可根据 LD 50 计算方法要求按等 比级数或等差级数安排。 ? 本实验用 机率单位法 计算 LD 50 ，要求按等 比级 数 排列，常用 1 ： 0.8 ，如敌敌畏的最高剂量为 125 mg/kg ，其次剂量组为 125 mg/kg *0.8=100 mg/kg ，依次类推为 80 、 64 和 51.2 mg/kg 五个剂量组。 （三）受试化学物配制与稀释 ? 1. 溶剂： ? 水溶性受试化学物以蒸馏水为溶剂配制成溶 液。 ? 脂溶性受试化学物以吐温 -80 、二甲基亚砜、 植物油等配制。 （三）受试化学物配制与稀释 ? 2. 受试物的稀释 ? 等容量稀释法， 各个剂量组的动物均给予 相同单位 体重体积 的受试化学物，按照 事先设计的剂量 分别 稀释 配制为几种不同的浓度 的受试物溶液。 ? 例如本次实验五个剂量组 : ? 各剂量组动物给予 相同单位体重体积 受试物均 为 10ml/kg 。 等容量稀释法 ? D ：设计的染毒剂量， mg/kg ? V ：动物给药量（相同单位体重体积）均为 10ml/kg ? X ：各组需配制的受试物溶液的浓度（ mg/ml ） ? 如：第一组染毒剂量 D=51.2mg/kg ，动物按 V= 10ml/kg 体重给药，配制的受试物浓度为 X=51.2mg/10ml V D X ? ， ? 依次类推：五个组所需配制的受试物浓度分别为 ? 第一组： 51.2mg/10ml ? 第二组： 64mg/10ml ? 第三组： 80mg/10ml ? 第四组： 100mg/10ml ? 第五组： 125mg/10ml ? 各剂量组小鼠灌胃容量计算 : 小鼠灌胃容量 V ml= 体重（ g ）× 10ml/1000g 各剂量组小鼠染毒剂量 : 小鼠染毒剂量 = V ml ×各组的受试物浓度（ mg/10ml) （四）灌胃方法： ? 小鼠灌胃法：左手拇指和食指捏住小鼠头部两耳后 皮肤，无名指或小指将尾部紧压在手上，使小鼠腹 部向上，尽量使其 体位垂直 ，注意使动物的上消化 道固定成一直线。右手持连着灌胃导针的注射器， 将灌胃针由动物口腔侧插入，避牙齿，沿咽后壁缓 缓滑人食管。 若遇阻力，可轻轻上下滑动探索，一 旦感觉阻力消失，即深人至胃部， 一般进针深度小 鼠 2.5 ～ 4cm ，随后将受试物溶液注入。如遇动 物挣扎，应停止进针或将针拔出，千万 不能强行插 入 ，以免穿破食管，甚至误入气管，导致动物立即 死亡。 小鼠一次灌胃体积为 10-20ml/kg （五）中毒体征和死亡情况观察 ? 染毒后 观察和记录中毒体征 及出现的时间、 死 亡数量和时间 及死亡前的特征。 ? 高剂量组动物的死亡常很快发生，染毒后应即 刻密切观察。 ? 根据观察情况分析中毒特点和毒作用靶器官。 观察的项目包括： ? （ 1 ）中枢神经系统和神经肌肉系统：体位异常、叫声异 常、不安、呆滞、痉挛、抽搐麻痹、运动失调、对外反应 过敏或迟钝； ? （ 2 ）植物神经系统：瞳孔扩大或缩小、流涎或流泪； ? （ 3 ）呼吸系统：鼻孔流液、鼻翼煽动、血性分泌物、呼 吸深缓、呼吸过速、仰头呼吸、； ? （ 4 ）泌尿生殖系统：会阴部污秽、有分泌物、阴道或乳 房肿胀； ? （ 5 ）皮肤和毛：皮肤充血、紫绀、被毛蓬松、污秽； ? （ 6 ）眼：眼球突出、结膜充血、