基于线粒体信号通路对异硫氰酸苯乙酯诱导IPEC-J2细胞凋亡调控机制的研究.pdf

摘 要 摘 要 目的：本文旨在研究异硫氰酸苯乙酯 （PEITC）对猪空肠上皮细胞 （IPEC-J2）的 毒性作用，初步探讨PEITC 诱导IPEC-J2 细胞凋亡的可能机制。 IPEC-J2 PEITC 3μM 9μM 方法：本实验以 细胞为研究对象，用不同浓度的 （ 、 和 27μM）处理IPEC-J2 细胞24h 后进行以下实验： （1）PEITC 对IPEC-J2 细胞氧化损伤的作用：使用MTT 法检测细胞增殖率；检 SOD GSH-Px CAT GSH MDA H O LDH 测细胞中 、 、 的活性和 、 、 2 2 的含量及培养上清中 2+ 的活性；用流式细胞仪检测ROS和Ca 的含量。 （2）PEITC对IPEC-J2 细胞线粒体损伤的作用：流式细胞仪检测线粒体膜电位变 化；检测线粒体中ATP 含量。 （3）PEITC 对IPEC-J2 细胞凋亡的作用：流式细胞仪检测IPEC-J2 细胞的凋亡率; Western Blot 检测线粒体凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9 和PPAR-1 c Cytochromec Cyt c 的表达；分别检测细胞色素 （ ， ）在线粒体中和细胞质中的含量； 用Caspase-9 抑制剂处理IPEC-J2 细胞30min，然后用不同浓度的PEITC （3μM、9μM 和27μM）处理IPEC-J2 细胞24h，流式细胞仪检测IPEC-J2 细胞的凋亡率。 4 PEITC IPEC-J2 IPEC-J2 （） 对 细胞周期的作用：流式细胞仪检测 细胞周期的变 化；Western Blot 检测细胞周期相关蛋白p53、CyclinA2 和Cdc25c 的表达。 结果： 1 PEITC IPEC-J2 MDA ROS （）随着 浓度的升高 细胞增殖率呈剂量依赖性下降； 、 、 2+ Ca 、LDH 的含量以及SOD、CAT 的活性呈剂量依赖性升高；GSH-Px 的活性及GSH 的含量呈剂量依赖性下降。 2 PEITC IPEC-J2 （）随着 浓度的升高 细胞的线粒体膜电位呈剂量依赖性下降；同 时细胞中ATP 含量呈剂量依赖性降低。 （3）PEITC 提高了蛋白Cleave Caspsese-3/Pro Caspase-3、Cleave Caspsese-9/Pro Caspase-9 Bax/Bcl-2 CleavePARP-1/ProPARP-1 Cyt c 、 和 的比值， 从线粒体释放到胞质 中；随着PEITC 浓度升高IPEC-J2 的细胞凋亡率呈剂量依赖性升高；而在Caspase-9 抑制剂的干预下，IPEC-J2 细胞的凋亡率显著下降。 4 PEITC G /G S G /M （）随着 浓度的升高， 0 1期的比率呈剂量依赖性减少，而 期和 2