QIAGEN Plasmid Midi Kits(亲笔翻译中文版).docVIP

QIAGEN Plasmid Midi Kits 实验前准备： 使用前将RNase A 加入到Buffer P1。 检查Buffer P2 中SDS 是否有析出，如果有在37℃水浴下溶解。 Buffer P3在4℃预冷。 选择：将Lyseblue 加入到Buffer P1，使用前混匀。 实验操作： 从新鲜的选择培养基上挑取单菌落，在含有抗性的2-5ml的LB培养基上培养。培养约8h，37℃，摇床转速约300rpm。 ——摇菌管的体积至少为培养物体积的4倍。 按1/500或者1/1000的比例用选择性LB培养基稀释培养液。对于低拷贝质粒，100ml培养基加入100-200ul起始培养液。培养约12h-16h，37℃，摇床转速约300rpm。 收获菌：4℃，离心15min，离心力6000*g。 用4ml Buffer P1 重悬菌体。 ——如果加入lyseblue，使用前充分混合buffer P1。 ——为了有效的裂解菌体，需使用足够大的容器，以使lysis buffer 从分混合。 ——必需使菌体彻底重悬。 加入4ml buffer P2，迅速翻转管4-6次，室温下（15-25℃）静置5min。 ——不能使用漩涡震荡，以免剪断基因组DNA。 ——溶解液应当呈现出澄清。 ——不能让溶解反应超过5min。 ——使用完毕，buffer P2 需立即盖上盖子，防止空气中的二氧化碳酸化。 ——