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流式细胞仪实验方法 一、实验准备 1.标本制备 : 2.最小化非特异性结合 : 二、凋亡 1.凋亡的检测方法 :网站和其它 2.PI 染色法 3.Annexin V 法 4.TUNNEL 法 三、细胞因子 1.激活的细胞因子 2.CBA 四、血小板 1.活化 2.活化检测 3.网织血小板 五、红细胞 1.网织红细胞 2.PNH 3.胎儿红细胞 六、肿瘤学 1.DNA 细胞周期 2.蛋白 3.多药耐药 4.微小残留白血病 第一部分标本处理 一、流式细胞术常规检测时的样品制备 (一直接免疫荧光标记法 取一定量细胞 (约 1X106 细胞 /ml, 在每一管中分别加入 50μl的 HAB, 并充分混匀 , 于室温中静置 1 分钟以上 (,再直接加入连接有荧光素的抗体进行免疫标记反应 (如做双标或多标染色 ,可把几种标记有不同荧光素的抗体同时加入 ,。孵育 20-60 分钟后 , 用 PBS(pH7.2—7.4 洗 1-2 次,加入缓冲液重悬 ,上机检测。本方法操作简便 ,结果准确 , 易于分析 ,适用于同一细胞群多参数同时测定。虽然直标抗体试剂成本较高 ,但减少了间接标记法中较强的非特异荧光的干扰 ,因此更适用于临床标本的检测。 (二间接免疫荧光标记法 取一定量的细胞悬液 (约 1X106 细胞 /ml,先加入特异的第一抗体 ,待反应完全后 洗去未结合抗体 ,再加入荧光标记的第二