油松LEAFY_NEEDLY靶基因筛选及其功能特异性研究.pdfVIP

摘要 摘要 LEAFY (LFY) 编码一种植物特有的转录因子，存在藻类和所有的陆生植物中。 LFY 同源基因具有调控细胞分裂、花分生组织和花器官形成的功能，在成花诱导调控 网络中处于关键节点。相关研究表明，LFY 同源基因所编码的氨基酸序列在不同种子 植物中十分保守，功能也具有相似性。然而，与多数被子植物体内单拷贝的LFY 同 源基因明显不同的是，裸子植物中存在两类LFY 同源基因（LEAFY/NEEDLY），目 LFY NLY 前，对于 与 两个高度保守的同源基因在祼子植物生殖发育中的具体功能及 是否存在功能分化尚不十分清楚。 LFY NLY 本研究通过对油松 和 基因表达模式、模式植物中异源表达的功能差异 油松中差异响应基因以及基因组上结合位点差异分析，阐述了PtLFY 和PtNLY 在油 松中生殖发育调控中的功能特异性，为深入理解针叶树LFY 同源基因在生殖发育中 的具体作用及进化地位提供新的数据支撑。主要研究结果如下： 1 PtLFY PtNLY PtNLY （） 和 基因在调控油松生殖发育具有重要作用，其中 可能 在针叶树发育过程中发挥更核心调控功能。二者在不同组织中的表达存在明显差异， 主要在营养芽及花芽中表达，而在根、茎和针叶等组织几乎不表达；在雌雄球花的发 育后期表达水平下降，且在雄球花中下降更为显著，花粉成熟后期PtLFY 基因不表达； PtLFY PtNLY PtNLY 尽管 与 具有十分相似的表达模式，但几乎在所有样本中， 均具 有更高的表达水平，可能发挥更核心的调控作用。 2 LFY LFY LFY （）油松中 同源基因与拟南芥 基因的功能存在差异，过表达油松 同源基因促进下游花器官特征基因的表达，导致花器官形态变异，进一步确认PtLFY 和 PtNLY 基因在调控生殖发育中发挥关键作用。构建了p35S::LFY-GFP 和 p35S::NLY-GFP 植物表达载体，异源转化拟南芥结果表明，与野生型拟南芥相比，过 PtLFY PtNLY 表达 和 导致植株形态上发生了一些明显的变化，顶端花序分生组织转 变成二至三朵花以及侧枝被单生花取代的表型，另外，PtNLY 转基因植株还出现莲座 叶处产生单生花表型以及花变异的表型，表现为心皮数目增加；但转基因植株未观察 到促进植株提前开花的表型。 3 PtLFY PtNLY LFY （）油松 和 基因不能完全替代拟南芥中 基因发挥功能作用， I 油松LEAFY/NEEDLY靶基因筛选及其功能特异性研究 且PtNLY 基因功能与拟南芥LFY 基因更具有相似性。以拟南芥lfy-1 突变体为背景， PtLFY PtNLY lfy-1 PtNLY 过表达 和 基因可以部分恢复 表型，其中 在拟南芥中对花器 官发育的调控功能更强；对拟南芥野生型、lfy-1 突变体、PtLFY / lfy-1及PtNLY/ lfy-1 RNA-seq PtLFY PtNLY DEGs Differentially 转基因植株进