生化制药工艺 第2单元 植物细胞培养技术 单元2、植物细胞培养技术.pptx

生化制药工艺项目四 细胞工程制药技术目录细胞融合1植物细胞培养技术CONTENTS2动物细胞培养技术302植物细胞培养技术Part2 植物细胞培养技术一、植物细胞的全能性1、植物细胞的全能性细胞全能性为细胞的某种特征，有这种能力的细胞可保留形成有机体 所有的细胞类型的能力----1984年国际组织培养协会全能细胞是能够表达生物体基因组的任何一种基因，并能分化出该生物体内任何一种类型的细胞，进而发育为一个完全相同的生物体德国植物学家Haberlandt 1902年预言“植物细胞具有全能性”。不久Hanning成功地在培养基上培育出正常发育的萝卜和辣根菜的胚。称为植物组织培养的鼻祖Haberlandt（1854-1945）Part2 植物细胞培养技术一、植物细胞的全能性2、植物培养相关概念植物组织培养（tissue culture）/试管植物/离体培养在无菌条件下，将离体的植物器官（如根尖、茎尖、叶、花、未成熟的果实、种子等）、组织（如花药组织、胚乳、皮层等）、细胞（体细胞、生殖细胞等）、胚胎（如成熟和未成熟的胚）、原生质体，培养在人工配置的培养基上，给予适当的培养条件，诱发产生愈伤组织、潜伏芽等，或者长成新的完整植株一种实验技术植物细胞培养（cell culture）离体条件下，将愈伤组织或其他易分散的组织置于液体培养基中振荡培养，使组织分散成游离的悬浮细胞，通过继代培养使细胞增殖，从而获得大量的细胞群体的一种技术两者区别：是否形成组织Part2 植物细胞培养技术一、植物细胞的全能性2、植物培养相关概念外植体（explant）进行植物细胞培养所选取的植物部分愈伤组织（callus）由外植体的增生细胞产生的脱分化的植物细胞团脱分化（dedifferentiation）指植物离体器官、组织、细胞在人工培养液上，经过多次细胞分裂而失去原来的分化状态形成无结构的愈伤组织或细胞团的过程，使其回复到胚性细胞的状态再分化（redifferentiation）指离体培养的植物组织或细胞可以由脱分化状态再度分化成另一种或几种类型的细胞、组织、器官，甚至最终再生成完整植株Part2 植物细胞培养技术一、植物细胞的全能性3、植物组织/细胞培养的意义植物中含有丰富的次生代谢物质，有25%的法定药物来自植物，规模化植物细胞培养以提取天然产物是解决此瓶颈的有前途的方法珍贵植物和名贵花草等种苗的快速繁殖植物细胞遗传、生理、生化和病毒方面的研究红豆杉紫杉醇据有关专家估计，全世界每年需要500kg紫杉醇才能满足广大癌症患者的需求。生产1 kg紫杉醇需要砍伐60年生大树3000-4000棵。若仅从树皮中提取紫杉醇，每年需砍伐150-200万棵左右的大树。红豆杉细胞培养具有如下特点可能会成为能够解决紫杉醇长期供应问题的非常有希望的手段：细胞培养过程都有效控制，不受地理环境、病虫害和季节等因素的影响，保证产物无限、连续、均匀地生产可以进行红豆杉细胞的筛选和培养条件的优化而获得超过原植株紫杉醇含量的细胞和培养条件易于在生物反应器中大规模、高密度地培养。减少占用可耕地面积，降低生产成本和提高生产率。利用现有的或探索新的生物技术进行红豆杉细胞紫杉醇代谢途径和规律的研究，使细胞定向合成次生代谢物Part2 植物细胞培养技术二、植物组织培养1、植物组织培养的要求用于培养的外植体细胞必须具有全能性离体隔离适宜的培养条件环境条件：光照、温度、湿度（1）光照表现在光强、光质、光照时间方面光照强度较强，幼苗生长的粗壮，而光照强度较弱幼苗容易徒长。一般光照强度为1000~5000 lx光周期，最常用的周期是16 h的光照，8 h的黑暗。 光质，对愈伤组织诱导，培养组织的增殖以及器官的分化都有明显的影响Part2 植物细胞培养技术二、植物组织培养1、植物组织培养的要求适宜的培养条件环境条件：光照、温度、湿度（2）温度大多数植物组织培养都是在23-27 ℃之间进行，一般采用25土2 ℃（3）湿度容器内相对湿度要保持在99%左右，环境的要求70％-80％（4）渗透压培养基中由于有添加的盐类、蔗糖等化合物，因此，影响到渗透压的变化。通常1-2个大气压对植物生长有促进作用，2个大气压以上就对植物生长有阻碍作用（5）通气氧气是组织培养中必需的因素，瓶盖封闭时要考虑通气问题，可用附有滤气膜的封口材料固体培养基→活性炭；液体培养基→振荡Part2 植物细胞培养技术二、植物组织培养1、植物组织培养的要求适宜的培养条件营养条件无机盐类大量元素：C、H、O、N、P、K、S、Ca、Mg微量元素：Mo、Co 、Mn、Cu、Zn、Fe等无机盐对非洲紫罗兰组织培养的影响Part2 植物细胞培养技术二、植物组织培养营养条件有机营养碳源：蔗糖、葡萄糖、果糖蔗糖浓度：使用量1-5%，常用量为2-3%，幼胚培养可提高到4-1