Ⅲ—01血清γ球蛋白的分离与纯化.docxVIP

m-oi血清濟蛋白的分离与纯化 【目的要求】 1?掌握分离纯化蛋白质的基本原理和基本过程。 熟悉盐析、离心、层析、电泳、比色等生物化学基本技术在蛋白质分离纯化中的综合 应用。 4?学会设计和制走分离纯化蛋白质的实验方案、技术路线和质呈监控和保证措施。 【实验原理】 不同蛋口质的理化性质和生物学性质各有不同，利用这些不同便可获得分离 纯化。 血清蛋白有300多种，可粗略分成清、球蛋白两大类，丫球蛋白只是球蛋白中的一个亚 类。欲用常规方法获得，可先用半饱和硫酸钱从血清中盐析出球蛋白，接着用葡聚糖凝胶 G—25 ( Sephadex—25 )脱去球蛋白中的盐分(硫酸钱),最后用DEAE (二乙基氨基乙 基)纤维秦阴离子交换柱，便可直接从脱盐的球蛋白溶液中分离纯化出Y球蛋白，其反应机 理如下： 纤维素-0CH2)2-N(C2Hj)2——?纤维素?0?〔况)2?忙;…比PO4 H却H2PO4 I \汎 H c2hsH2PO4pH6.3细盐析和逾的球蛋白液? c2hs H2PO4 pH6.3 细盐析和逾的球蛋白液 、 纤维素-O-(CH2)2-Nf-a 和 B 』\灿 赠到枉上的?和R -球蛋白 XCOOH 僭蛋白/ 、耐 被DEAE柱分篦纯化的￥球蛋白 被柱层析交换结合的?球蛋白和B球蛋白，可通过增加洗脱液的离子强度或降低洗脱的 pH值(也可两者同时改变)，使其分部洗脱下来而被纯化。 纯化