番鸭细小病毒（MPV）和鹅细小病毒（GPV）（鸭源）胶乳凝集抑制试验.pdfVIP

GB/T ××××—×××× 附录E （规范性附录） 番鸭细小病毒（MPV）和鹅细小病毒 （GPV ） （鸭源）胶乳凝集抑制试验 E.1 试剂配制 E.1.1 0.01 mol/L pH 7.2 的磷酸盐缓冲液（PBS） 甲液 0.2 mol/L 磷酸氢二钠溶液 Na HPO 28.4 g 2 4 双蒸水 加至1000 ml 乙液 0.2 mol/L 磷酸二氢钠溶液 NaH PO 24.0 g 2 4 双蒸水 加至1000 ml 取甲液72 ml 和乙液28 ml 混合后，用双蒸水稀释20 倍，并按0.85 %加入氯化钠。以 121℃灭菌30 min，备用。 E.1.2 生理盐水 NaCl 8.5 g 双蒸水 加至1000 ml.。以121℃灭菌30 min，备用。 E.2 番鸭细小病毒 （MPV）胶乳凝集抑制试验 E.2.1 胶乳凝集试验 （LPA） E.2.1.1 操作方法 按表 1，用稀释液（0.01 mol/L pH 值 7.2 的PBS 或生理盐水）将抗 原作连续倍比稀释后，取不同稀释度的抗原各 10 µl 分别与等量致敏胶乳在洁净的玻片或 96 孔细胞培养板盖上混匀，室温(22+4℃）或37℃水浴箱中静置5～15 分钟，观察凝集反应。 试验设致敏胶乳对照、抗原对照和抗原加稀释液对照。 表1 胶乳凝集试验 孔数 1 2 3 4 5 6 7 8 … 稀释倍数 2 4 8 16 32 64 128 256 … 50 50 50 50 50 50 50 50 稀 释 液 … 抗 原 50 50 50 50 50 50 50 50 弃50 取不同稀释度的抗原10 µl 与10 µl 致敏胶乳混匀，室温(22+4℃）或37℃ 水浴箱中静置5～15 分钟，观察凝集反应。 结 果 ++++ ++++ ++++ ++++ +++ ++ + - … E.2.1.2 结果判定 E.2.1.2.1 对照试验 出现如下结果试验方可成立，否则应重试。致敏胶乳对照呈 “-”； 抗原加致敏乳胶对照呈 “++++”；抗原加稀释液呈“-”。 E.2.1.2.2 判定标准 ++++ 1～3 分钟形成粗大凝集块，液体澄清； 13 GB/T ××××—×××× +++ 形成较大的凝集块，且液体澄清； ++ 50%胶乳凝集，颗粒明显，液体较澄清； + 少量胶乳凝集，液体较混浊； - 无凝集颗粒，液体呈均匀乳状。 以出现“++”以上凝集者判为阳性；“+”为可疑；“-”为阴性；以出现 “++”凝集反 应的最高稀释度作为判定终点。如表1 的抗原LPA 效价为1 ︰64。 E.2.2 抗原凝集工作液的制备 E.2.2.1 抗原凝集价 （LPA）测定 用稀释液（0.01mol/L pH 值 7.2 的PBS 或生理盐水） 将病毒抗原液连续倍比稀释后，各取10 µL 不同稀释度的病毒液与等量致敏胶乳在洁净的玻 片或96 孔细胞培养板盖上混匀，室温(22+4℃）或37