丙泊酚血药浓度测定.docxVIP

分子式： 分子式： C12H18O。分子量：178.274 血浆丙泊酚浓度高效液相色谱法（HPLC ）测定方法 色谱条件 色谱柱为 Kromasil C18 （5卩m,4.6mnrK250mm,柱号：KR- 002545）;柱压：90?100kg cm-1;柱温：40°C，流动相：乙腈-水（70:30）;流速: 1ml min-1 ;荧光激发波长为276nm；发射波长310 nm；内标物：麝香草酚；定 量方法：峰面积法。高效液相色谱法测定中血浆内源性物质对测定无干扰， 内标 麝香草酚与丙泊酚完全分离，内标麝香草酚的保留时间约为7.1 min,丙泊酚保留 时间约为11.1mi n。样品分离色谱图见图1。 图1丙泊酚和麝香草酚的高效液相色谱图 A空白血浆B丙泊酚的标准溶液 C丙泊酚和麝香草酚的标准溶液 D样品血浆 1麝香草酚2丙泊酚 丙泊酚标准溶液配制 精密称取丙泊酚对照品10mg,并加入100ml的量瓶中, 精密称取麝香草酚10mg,加入100ml的量瓶中，用用乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀后即可得浓度为100 mg ? L- 1的丙泊酚标准储备 液。精密量取丙泊酚对照品储备液1ml，加至10ml量瓶中用乙腈稀释至刻度， 精密称取麝香草酚10mg,加入100ml的量瓶中，用 麝香草酚标准工作液配制 乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀后即可得浓度为100mg?L-1的麝香草酚标准工作液。 血药浓度测定 量取待测的肝素抗凝血浆1ml加入试管中，并准确加入内标 物即100mg ? L-1麝香草酚标准储备液100 pl，再加入PH6.0、浓度为0.1mol.l-1的磷 酸二氢钾缓冲溶液100 p l，摇匀混合后,加入5 ml环己烷有机溶剂，立即漩涡混和 3min。再在低温离心机中3000r.min-1离心20min,静置分层，取4ml上层液移至另一 尖底试管中，在50C下用N2吹干，用100卩l流动相溶解，取20卩l进样分析。？ 乙腈-水（70:30） 麝香草酚 磷酸二氢钾缓冲液PH6.0、浓度为0.1mol.l-1 环己烷 标准曲线制备 取6支10ml具塞试管，并分别加入1ml空白血浆，再精密量取 适量的丙泊酚标准溶液，使其血药浓度分别相当于0.04 p g.ml-1, 0.1卩g.ml-1, 0.25 p g.ml-1，1 p g.ml-1，5 p g.ml-1，25 p g.ml-1 的6种浓度的含药血浆（10mg ? L-1: 4 ml-1浓度范围内线性回归方程为丫=1.1679X-0.0025,相关系%r=9979,见图2R2 = 0.996p l、10.1 p l、25.64 p l、111.1p l、1000 p l，100 mg - L-1： 333.3 p l），取上述含 药血浆各1ml ml-1浓度范围内线性回归方程为丫=1.1679X-0.0025,相关系%r=9979,见图2 R2 = 0.996泊酚:S内标0 20 15 10 5 8丙泊酚:S内标 0 0.0000 5.0000 10.0000 15.0000 20.0000 25.0000 Ji 图2标准曲线和线性方程 回收率与精密度实验 提取回收率 在1ml空白人血浆中准确加入适量的丙泊酚标准溶液，分别配 制成0.1 g.ml-1, 1卩g.ml-1和25卩g.ml-1低、中、高3种质量浓度的丙泊酚标准血 样（10mg - L-1： 10.1 卩 l、111.1 卩 l, 100 mg ? L- 1： 333.3卩 l）,经萃取后再加内 标，测定其峰高比R1，同法测定不经萃取的标准丙泊酚溶液加内标的峰高 R2, 按R1/R2X100%计算提取回收率，结果见表1. 表1血浆中丙泊酚提取回收率（x _s，n=5） 质量浓度（卩g.mL-1） 回收率/% RSD/% 0.1 99.15± 2.38 2.40 1 106.88土 3.28 3.07 25 98.28土 4.49 4.58 方法回收率 同上述方法分别配制浓度也为0.1卩g.mL-1，1卩g.mL-1，25卩 g.mL-1三种浓度的丙泊酚标准血样各 5份（10mg ?L-1： 10.1卩l、111.1卩l ,100 mg -L 1: 333.3卩l）,按上述血药浓度测定方法进行操作，将测定的丙泊酚峰高与内标 峰高比带入标准曲线，求出测定药物浓度，用测定浓度 /实际浓度x 100%公式求 得方法回收率，见表2。 表2测定方法回收率 （X：s , n=5） 质量浓度（卩g.mL-1） 回收率/% RSD/% 0.1 101.85± 1.36 1.34 1 101.16± 1.64 2.14 25 100.01 ± 1.74 1.74 精密度实验 同上述方法分别配制浓度为0.1, 1, 25卩g