09游泳池水微生物检验方法细菌总数测定操作规程.docVIP

— PAGE PAGE 2 欢迎下载 1、目的： 游泳池水微生物检验方法细菌总数测定。 2、适用范围： 本标准适用于游泳池水细菌总数的测定。 3、责任： 使操作者熟悉本规程，并在具体样品检验中严格遵照操作，确保检测结果准确性。 4、内容 4.1定义 细菌总数：指水样在一定条件下培养后（如培养基成分和PH值、培养温度和时间以及需氧性质等），1ml检样中所含菌落的总数。本方法规定的培养条件下所得结果，只包括一群在营养琼脂上生长发育的嗜中温性需氧菌落总数。 细菌总数可作为判定游泳池水被污染程度的标志，也可以为游泳池水消毒效果的判定和评价提供依据。 4.2仪器 三角瓶。 量筒。 PH计或精密PH试纸。 高压消毒锅。 试管。 灭菌平皿：直径9cm。 灭菌刻度吸管：1mL、2ml、10mL。 酒精灯。 恒温培养箱。 放大镜。 4.3培养基和试剂 4.3.1营养琼脂培养基 4.3.1.1成分：蛋白胨 10g 牛肉浸膏 3g 氯化钠 5g 琼脂 15～20g 蒸馏水 1000ml 4.3.1.2制法：将上述各成分混合，加热溶解，校正pH至7.4，过滤分装，121℃ 4.3.2 10%（m/m）硫代硫酸钠溶液，121 4.5 操作步骤 4.5.1 采样瓶的要求和预处理：用于微生物分析的采样瓶要无酸、无碱、无毒的玻璃容器。采样瓶在灭菌前加入足量的10%（m/m）硫代硫酸钠（Na2S2O3）溶液.一般情况下125ml的采样瓶加0.1ml，加完后121℃ 4.5.2 用灭菌吸管吸取均匀水样1ml，注入到灭菌平皿内，另取1ml注入另一灭菌平皿内作平行接种。取1ml加到9ml无菌生理盐水中作1：:10稀释，混匀后取2ml分别加到两个无菌平皿内，每皿1ml。 4.5.3 将溶化并冷却至45℃的营养琼脂培养基倾注平皿内，每皿约15ml，另取一个不加样品的平皿作空白对照。立即摇匀平皿，使水样和培养基充分混匀。带琼脂凝固后翻转平皿，置36℃±1 4.6 菌落计数方法 先用肉眼观察，点数菌落数，然后再用放大5～10倍的放大镜检查，以防遗漏。记下各平皿的菌落数后，求出同一稀释度各平皿生长的平均菌落数。若平皿中有连成片状的菌落或花点样菌落蔓延生长时，该平皿不宜计数。若片状菌落不到平皿的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀时，则可将此半个平皿菌落计数后乘以2，所得结果代表全皿菌落数。 4.7菌落计数的报告 4.7.1选择平均菌落在30～300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告（见表1中的例1）。 4.7.2若有两个稀释度，其平均菌落数均在30～300之间，则由两菌落总数之比值来决定，若其比值小于或等于2，应报告其平均数，若大于2，则报告其中稀释度较低的平皿菌落数（见表1中的例2、例3）。 4.7.3若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告（见表1中的例4）。 4.7.4若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告（见表1中的例5）。 4.7.5若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，其中一个稀释度平均菌落数大于300，而相邻另一个稀释度平均菌落数小于30，则以接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告（见表1中的例6）。 4.7.6若所有稀释度均无菌生长，报告数为每毫升小于1cfu（见表1中的例7）。 4.7.7菌落计数的报告，菌落数在10以内时，按实有数值报告；大于100时，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，应以四舍五入法计算。为了缩短数字后面零的个数，可用10的指数来表示（见表1中的报告方式栏）。在报告菌落数为“不可计”时，应注明样品的稀释度。 表1 细菌计数结果及报告方式 例次 不同稀释度平均菌落数 两稀释度菌落之比 菌落总数cfu/ml 报告方式 cfu/ml 10-1 10-2 10-3 1 1365 164 20 — 16 400 16 000或1.6×104 2 2760 295 46 1.6 38 000 38 000或3.8×104 3 2890 271 60 2.2 27 100 27 000或2.7×104 4 不可计 4650 513 — 513 000 510 000或5.1×105 5 27 11 5 — 270 270或2.7×102 6 不可计 305 12 — 30 500 31 000或3.1×104 7 0 0 0 — 0 ＜1