MTT简介及试剂盒说明.pdf

产品简介： 1. MTT 细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)被广泛应用于细 胞增殖和细胞毒性的实验方法。由于细胞活力与细胞数呈正相关，因此常常用来检测细胞的增殖情况。 MTT 可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成结晶状的深紫色产物formazan 。在特定溶剂存在的情况下， 可以被完全溶解。然后通过酶标仪可以测定570nm 波长附近的吸光度。细胞增殖越多越快，则吸光度 越高；细胞毒性越大，则吸光度越低。 2. 本试剂盒采用了独特的Formazan 溶解液配方，无需去除原有的培养液，可以直接加入Formazan 溶解 液溶解formazan 。从而避免了由于去除培养液时formazan 被部分去除而引起的误差。 3. 本试剂盒背景低，灵敏度高，线性范围宽，使用方便提高了可靠性。 4. 本产品为500 次（5 个96 孔细胞培养板）操作。 产品内容： MTT 染色液 5ml Formazan 溶解液 55ml 说明书 1 份 保存条件： MTT 染色液需-20℃避光保存；Formazan 溶解液可以室温保存。 注意事项： 1. 由于使用96 孔板进行检测，如果你的细胞要养48 h 或更长，建议不要吝啬96-孔板的四周边孔，这32 个边孔不能使用，建议加入灭菌PBS 以饱和中间64 个孔的水分。因为细胞培养过程中，边孔的水分蒸 发很快，培养液及里面的药物会出现浓缩现象，细胞的状况就复杂了 2. MTT 溶剂在低温情况下会凝固，使用前请室温放置或20-25 ℃水浴温育片刻至全部融解后使用。 3. MTT 一般最好4ºC 避光保存两周内有效，保存在-20 度长期保存，避免反复冻融，最好小剂量分装， 用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解，尤其当MTT 变为灰绿色时就绝对不能再用了。 4. Formazan 溶解液结冻或产生沉淀时可以37℃水浴孵育以促进溶解，并且必须在全部溶解并混匀后使 用。 5. 孵育时，须避光 6. MTT 有致癌性，用的时候小心,有条件最好带那种透明的簿膜手套.配成的MTT 需要无菌，MTT 对菌 很敏感。 使用说明： 1. 收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，每孔加入100ul,铺板使待测细胞调密度至1000- 10000 孔，（边 缘孔用无菌PBS 填充）。 2. 5%CO2，37℃孵育，至细胞单层铺满孔底（96 孔平底板，具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的 大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。加入浓度梯度的药物，原则上，细胞贴壁后即可加药，或两小 时，或半天时间，每孔0-10ul，设3-5 个复孔.建议设5 个。 3. 5%CO2，37℃孵育16-48 小时，倒置显微镜下观察。 4. 每孔加入10 微升MTT 染色液，继续培养4h 。若药物与MTT 能够反应，可先离心后弃去培养液，小 心用PBS 冲2-3 遍后，再加入含MTT 的培养液。 5. 每孔加入100 微升Formanzan 溶解液，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测 仪570nm 测定吸光度。如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片。 6. 同时设置调零孔（培养基、MTT 染色液、Formanzan 溶解液），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介 质、培养液、MTT 染色液、Formanzan 溶解液） 1 MTT 法 什么是MTT 法? 又称MTT 比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线 粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT 还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒 （Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能 溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm 波长处测定其光吸收值，可间 接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT 结晶形成的量与细胞数成正比。 该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细 胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经济。 MTT 法 - 缺点： 由于MTT 经还原所产生的甲瓒产物不溶于水，需被溶解后才能检测。这不