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- 2021-02-01 发布于未知
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DNA 提取过程中各种试剂的作用及原理
1.溶液 I—溶菌液:
溶菌酶:它是糖苷水解酶,能水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的 β-1,4
糖苷键,因而具有溶菌的作用。当溶液中 pH 小于 8 时,溶菌酶作用受到抑制。
葡萄糖:增加溶液的粘度,维持渗透压,防止DNA 受机械剪切力作用而降解。
EDTA:(1)螯合Mg2+、Ca2+等金属离子,抑制脱氧核糖核酸酶对 DNA 的降解
作用(DNase 作用时需要一定的金属离子作辅基); (2)EDTA 的存在,有利于
溶菌酶的作用,因为溶菌酶的反应要求有较低的离子强度的环境。
2.溶液 II-NaOH-SDS 液:
NaOH:核酸在pH 大于 5,小于 9 的溶液中,是稳定的。
但当 pH>12 或 pH<3 时,就会引起双链之间氢键的解离而变性。
在溶液 II 中的NaOH 浓度为 0.2mo1 /L,加抽提液时,该系统的 pH 就高达 12.6,
因而促使染色体 DNA 与质粒 DNA 的变性。
SDS:SDS 是离子型表面活性剂。它主要功能有:
(1)溶解细胞膜上的脂质与蛋白,因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜。
(2)解聚细胞中的核蛋白。
(3)SDS 能与蛋白质结合成为 R-O-SO3-…R+-蛋白质的复合物,使蛋白质变性
而沉淀下来。
但是 SDS 能抑制核糖核酸酶的作用,所以在以后的提
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