第14章基因重组和基因工程 2.pptVIP

限制酶切位点 限制酶消化 除去中间片段 cos L R cos cos L 左臂 R cos 右臂 真核生物染 色体 DNA 限制酶部分消化 外源 DNA 与载体 DNA 混合 连接反应 体外包装 用重组噬菌体 感染大肠杆菌 ~20 Kb DNA 片段 cos L R cos ~20 Kb 外源 DNA 片段 基因文库 用随机切割的真核生物染色体 DNA 片段构建基因文库 mRNA cDNA 双链 cDNA 重组 DNA 分子 cDNA 文库 反转录酶 载体 受体菌 复制 ? 从 cDNA 文库获取目的基因 逆转录酶 A A A A T T T T AAAA SI 核酸酶 DNA 聚合酶Ⅰ 碱水解 T T T T 目录 （二）克隆载体的选择和构建 目的不同，操作基因的性质不同， 载体的选择和改建方法也不同。 目录 （三）外源基因与载体的连接 方式： (1) 同一限制酶切位点连接 (2) 不同限制酶切位点连接 配伍末端连接 1. 粘性末端连接 Bam H Ⅰ 切割反应 GGATCC CCTAGG T4 DNA 连接酶 15o C GATCC G G CCTAG + 目的基因用 Bam H Ⅰ切割 G CCTAG G CCTAG GATCC G GATCC G 载体 DNA 用 Bam H Ⅰ 切割 G CCTAG G CCTAG GATCC G GATCC G 重