奶牛乳房炎病原菌分离鉴定方法、奶牛乳房炎治疗诊断方法.pdfVIP

DB  FORMTEXT  21  FORMTEXT  XXXXX — FORMTEXT  XXXX A A 附 录 A （资料性） 奶牛乳房炎病原菌分离鉴定方法 A1.金黄色葡萄球菌的检验 A1.1 主要试剂和试验方法： A1.1.1 革兰氏染色： A1.1.1.1 涂片、火焰固定。 A1.1.1.2 草酸铵结晶紫染1min。 草酸铵结晶紫染液的配制： 溶液A：结晶紫2g，95%酒精20mL，溶液B：草酸铵0.8g，蒸馏水80mL。将A、B溶液混合，用滤纸过 滤后即可使用。 A1.1.1.3 自来水冲洗。 A1.1.1.4 加碘液覆盖涂面染约1min。 A1.1.1.5 水洗，用吸水纸吸去水分。 A1.1.1.6 加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，20s后水洗，吸去水分。 A1.1.1.7 沙黄液 （稀）染2min后，自来水冲洗。干燥，镜检。 革兰氏阳性菌染色为蓝紫色，革兰氏阴性菌染色为红色。 A1.1.2 触酶试验 取槽置于洁净的试管内或玻片上，然后加3%过氧化氢数滴；或直接滴加3%过氧化氢于不含血液的 细菌培养物中，立即观察结果。有大量气泡产生者为阳性，无则为阴性。 A1.1.3 血浆凝固酶试验 吸取0.5mL兔血浆与0.5mL金黄色葡萄球菌浸液肉汤24h培养物充分混匀，置36±1℃培养，每隔半小 时观察一次，连续观察6h，出现凝固，即将小试管倾斜或倒置时，内容物不流动，判为阳性。同时做阴 阳性对照。 7 DB  FORMTEXT  21  FORMTEXT  XXXXX — FORMTEXT  XXXX A1.2 乳样的采集 选取出现临床症状（或者怀疑为隐性乳房炎）乳房炎奶牛，先用温水，再用0.2%新洁尔灭擦洗乳房， 最后用70%的酒精擦拭乳头。采样者同时进行手指擦拭消毒。每个乳室先挤去头2～3把奶，以排除污染 的杂菌，每头奶牛取乳样5mL于无菌乳样杯中，待检。 A1.3 病原菌的分离培养 初步诊断：将少量乳汁涂片、革兰氏染色、镜检。如发现圆球形革兰氏阳性细菌可怀疑为葡萄球菌。 分离培养：将乳样摇匀，分别取适量接种于营养肉汤 （10%血清）、鲜血琼脂、麦康凯琼脂培养基 （平板）后，置于37℃温箱培养24～48h。观察每个平板中细菌生长的情况，记录菌落生长表现。 普通琼脂平板上，37℃，24～72h培养后，可见到湿润、光滑、隆起的圆形金黄色菌落。挑取典型 菌落涂片、染色、镜检 （镜检呈葡萄状排列，无芽孢、荚膜，直径0.5～1 m，革兰氏染色阳性），并 µ 挑取单个可疑菌落移植于肉汤和斜面培养基，经37℃培养24～48h。24h后没有长菌的平板，再用相应的 增菌肉汤涂划一次，继续培养，24～48h后，再作检查，以防漏检。将剩余的乳样存放于4℃冰箱内备用。 营养肉汤中呈浑浊生长，管底有少量灰白色沉淀； 血液琼脂平板中菌落较大，呈金黄色、圆形，周围出现明显的β–溶血。 A1.4 生化鉴定 触酶试验：触酶阳性。 血浆凝固酶试验：凝固酶试验阳性。 糖发酵试验：能分解甘露醇、乳糖、葡萄糖、麦芽糖、蔗糖。 色素产生