化学发光分析和生物发光分析在医学检验中的应用.pdf

黄芩 201146603050 化学发光分析和生物发光分析在医学检验 中的应用 一、化学发光是利用化学反应产生的能量 , 使分子处于激发态 , 当激发 态分子返回到基态时就发出光。 1、方法：鲁米诺化学发光法 鲁米诺（ 3 一氨基苯二酞阱） 在碱性介质中可被过氧化物等一类氧化 剂氧化而发出波长为 425nm 的光 , 许多金属离子 （Co 2+ , Fe2+，Fe3+，Cu 2+，Cr2 +等）通过它们对鲁米诺化学发光的催 化作用而被测定，鲁米诺化学发光对过氧化氢的测定 , 在医学检验中很 有价值 , 因为一系列酶促反应中都可产生氧化氢 , 因而都可采用鲁米诺 化学发光法来进行检测。例如血清中葡萄糖的测定 , 在中性 PH下，葡萄 2 2 糖首先被葡萄糖氧化酶氧化 , 同时产生等量的H O , 然后加入弧碱性 的缓冲溶液使化学发光开始。 2、原理： 葡糖糖氧化酶 Β-D-葡萄糖 + O + H O —————— D- 葡萄糖 + H O 2 2 2 2 OHˉ H O + 鲁米诺 —————— 产物 + 光 2 2 3 Fe( CN ) 6 _ 根据这个原理，采用一个流通系统 , 并把葡萄糖氧化酶固定在琼脂糖 上, 测定血清中的葡萄糖。结果表明 , 鲁术诺化学发光法与葡萄糖的标 准分析方法所得的结果非常一致 , 在 10 ˉ5~ 10 -4 M 范围内都成线性。但 此法用于尿中葡萄糖测定时有千扰 , 这是由于在碱性介质中 , 尿酸会减 少 H2 O 2 的产生。 3、意义： 胆固醇氧化酶将胆固醇氧化成胆街烷酮 , 并有化学计量的过氧化物生 成, 通过对生成的过氧化物进行发光检测 , 就可对胆固醇进行定量。此 外, 鲁米诺化学发光法还可用于研究白细胞的吞噬过程 , 对其吞噬功能 作出评价。 L- 氨基酸及其氧化酶 , 次黄嗓岭和黄嗓吟氧化酶 , 维生 素B 12, 尿酸等也可用此法来测定。 4、样品处理： 用氢氧化钡和硫酸锌混合液处理尿样 , 可除去干扰 , 用化学发光法测定 经上述处理过的尿中葡萄糖 , 回收率可达 100.5 ±3.3%，并与常规的比 色分析法有很好地相关性（ r=0.96 ）。 5、其它化学发光体系 双（ 2,4,6- 三氯苯基）草酸醋 ( 简称TCPO)与过氧化氢反应时也会发出 光, 少量的碱 ( 三乙胺 ) 可促进和加强此发光。 TCPO发光分析的过程与鲁 米诺化学发光类似。 二、生物发光则是化学发光的一个特殊类型 , 其激发能来自生物体内酶 催化反应。 与其它的分析方法相比 , 发光分析法具有灵敏度高。（可测定低至 10 - 15 M ）, 线性范围宽。（通可达 2 —— 3 个数量级） 分析速度快 , 不 需要昂贵