菌种活化方法.docxVIP

精品文档 精品文档 PAGE PAGE #欢迎下载 低温保存管（cryo tube ）中之一般菌种临时存放及活化 低温保存管之临时存放及解冻 低温保存管（cryo tube ）应存放于—20C ~ — 80C之低温条件下。 准备37 C之70 %（V/V）酒精浴槽（只能在电气水浴槽中改放酒精，不可以 火加温，以免危险；若以37 r水浴取代，应避免水中微生物污染），其中事先 安放小试管架（可放置cryotube 之大小），液面不可高达管塞。 3?将cryotube 从低温保存条件中取出，置于 37 C浴槽之小试管架上。 4.不断轻微摇动cryotube，液面不可高至管塞，直至结冰完全溶解（约需2分 钟）。 菌株活化：在无菌操作下 用无菌微量吸管，从已溶解之 cryotube 吸取50 ?1 （或1 ~ 2滴）之菌液， 滴入固态指定培 ）某一边缘附近，以划线 法接种于培养基。 2?将接种好的培养基置于 指定温度的培养箱中培养。 划线法 手持金属接种环，用酒精灯将接种环（共约 5公分）烧至火红，并不断来回 烧烤金属固定杆之前约10公分，等待约10秒钟，将接种环前端轻触培养基边 缘凝胶（无菌体部份），待接种环完全冷却后，以环沾黏菌滴，由培养基边缘向 中央轻轻横划紧接的并行线，直到涵盖 1/3培养基为止（I区）。 灼烧接种环，待数秒冷却后，旋转培养基自I区涂布的边缘再横划数条线到 未接种的区域（II区）。 重复2.的动作完成III 区与IV 区 灼烧接种环，将接种环归位 图示 （1）金属接种环 (2)平板划线法 菌滴. 冷冻干燥管之开管说明 下列步骤请在无菌环境下操作： 1、 以沾有70%酒精的棉花，擦拭外管，在火焰上加热外管之尖端。 2、 滴数滴无菌水于加热处，使外管破裂，再以硬棒敲破尖端。 3、 取出隔热纤维纸和内管，以灭菌过的镊子取出内管之棉塞。 4、 ( a ) 适用于细菌 用无菌吸管，吸取0.3-0.5 ml指定之液体培养基，滴入内管内，并轻微震荡(可 用该吸管协助)，直到均匀悬浮。 (b ) 适用于霉菌、酵母菌 用无菌吸管，吸取0.3-0.5 ml无菌水，滴入内管内，待干燥粉末溶解后，以无 菌吸管吸取并滴入约含有5ml无菌水之试管内，轻微震荡使其均匀后，静置 30 至60分钟。 5、 取0.1-0.2 ml之菌体悬浮液于 指定的平板培养基 上，做划线分离培养或做成 一系列之稀释，用无菌L型玻棒均匀涂抹，以检验菌种之纯度及活化情形，而剩 余的菌体则全部移入指定的液体培养基内，并依指定的温度培养之 。 6、 某些菌种经过冷冻干燥保存后，迟滞期 (lag period ) 较长，必须等培养 二倍时间后才能长出，且再经过一、二次继代培养(Subculture) 后才能正常生 长。经过以上的努力后仍培养失败，才视为不能活化。 7、 若菌种未能活化，或活化之菌落有疑问时，请于 收到菌种之一个月内，以问 题菌株反应单传真至本中心，即进行处理。 精品文档 精品文档 PAGE PAGE # 欢。迎下载 8 ?未开封之冷冻干燥管，请冷藏于 4C冰箱，切勿冷冻保存。 精品文档 精品文档 PAGE PAGE #欢迎下载 欢迎您的下载， 资料仅供参考! 致力为企业和个人提供合同协议， 策划案计划书，学习资料等等 打造全网一站式需求