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PAGE PAGE 9 PAGE PAGE 1 两种猪伪狂犬病血清学的检测方法比较 摘 要 本论文在试验中拟采用猪伪狂犬 gE 抗体试剂盒（阻断 ELISA 方法）用来血清样本检测，随后用得出的计算结果与 LAT的结果进行比较，对照两种方法的优点及其缺点和相关性，通过两种方法的重复性，稳定性，灵敏度比较，结果表明：ELISA的灵敏度比LAT高17.25 %，特异性比LAT高56.34 %，重复性误差比LAT低0.02 %，准确性比LAT高8 %。并对吉林省5个地区（长春、舒兰、榆树、德惠、磐石）的血清样本进行 PR 抗体检测，了解 PRV 在吉林省的感染情况以及流行情，结果表明：ELISA法的各项检测结果都比较准确。 关键词：猪伪狂犬病；血清学检测方法；乳胶凝集试验； ELISA试验 目 录 TOC \o 1-3 \h \u 摘 要 I Abstract II 前 言 1 1 猪伪狂犬病血清学检测方法研究进展 1 1.1 gB抗体检测方法 1 1.2 PCR病原检测 1 1.3 血凝抑制试验 1 1.4 病毒分离鉴定 2 1.5 切片检测 2 1.6 DNA探针技术 2 1.7 中和实验 2 1.8 免疫荧光技术 2 1.9 免疫接种试验 2 1.10 酶联免疫吸附试验(ELISA) 3 1.11 乳胶凝集试验(LAT) 3 2 材料和方法 3 2.1 试验材料 3 2.1.1 试验动物 3 2.1.2 试验试剂 4 2.3 试验方法 4 2.3.1 乳胶凝集(LAT)试验检测方法 4 2.3.2 PRRS酶联免疫吸附试验(ELISA)试验检测方法 4 2.3.3 灵敏度比较 4 2.3.4 特异性比较 5 2.3.5 重复性比较 5 2.3.6 准确性比较 5 3 试验结果 5 3.1 两种检测方法的特异性和灵敏度比较 5 3.2 两种检测试剂重复性对比 6 3.3 两种检测试剂的准确性比较 6 4 分析与讨论 7 4.1 猪伪狂犬病的症状及危害 7 4.2 猪伪狂犬病毒 7 4.3 各检测方法比较 7 4.4 ELISA和LAT的检测结果比较 7 结 论 9 参 考 文 献 10 前 言 猪伪狂犬病（Pseudorabies,PR）是由疱疹病毒、α-疱疹病毒亚科的伪狂犬病毒（Pseudorabiesvirus,PRV）引起的多种家畜和野生动物共患的急性接触性疾病[1]。发烧，猪流产，还有呼吸系统出现问题都是感染后的主要症状。正常猪感染后，其自身的免疫既能会遭受严重的损坏，然后就会引起其他传染性疾病。极大的影响了生产的效率，给给众多养殖户带来了不可逆转的损失。猪伪狂犬病是比较普遍的一种病，是因伪狂犬病毒感染进而引发的，是影响我们国家商品猪养殖业稳定发展的主要传染病之一[2]。同时也是当地检疫机构监控疾病的重点。目前，我国养猪场基本免疫了假白介素基因缺失疫苗，但野生病毒的感染在临床上仍很严重。疫苗免疫是预防这种疾病的最佳方法。 1 猪伪狂犬病血清学检测方法研究进展 1.1 gB抗体检测方法 gb可以说是一种保护性抗体。由于gb抗体根本不能区分带有的是全毒的疫苗和野毒疫苗和本省带有的病毒，也不能确定gb抗体的能力和其免疫的时间还有临床的发病率和许多相关检测，所以，在商品猪感染假性狂犬病病毒的条件下，gb抗体的检测受到限制。 1.2 PCR病原检测 dna作为聚合酶链反应的中介物质，在两种底物dna聚合酶和核苷酸的共同参与下，dna被复制许多才能重新定义他的组成和能力。pcr检测在细菌传染病的快速临床确诊中具有着及其重大的意义。pcr原理作用是放大位于两个已知序列之间的dna片段，和天然dna的复制比较相似。将被放大的dna分子作为模板，一对与dna模板5和3的结尾互补的寡核苷酸片段为引物，根据dna的半保留复制，然后在聚合酶的作用下，依据dna模板链的延伸，就可以合成新的dna[3]。通过此过程的不断重复可以放大目标dna片段。感染猪体内pcr（ge片段）的检测率相对较高。 1.3 血凝抑制试验 测试检测时应进行红细胞控制还有血清阳性控制和血清阴性这几种系列下的控制。一般来说，阳性血清控制时间比较长，在红细胞完全沉积前后的5 min内测试结果较好。在判断结果时，衡量反应板倾斜45度，孔里的红细胞活动良好，不凝结颗粒在边缘的凝结抑制。96孔滴定板用pbs溶液25μl滴定。每行第一孔掉