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* 聊城职业技术学院 王辅明 医学生物化学基础及技术 职业教育医学生物技术专业教学资源库 离心交换层析 一、基本原理 离子交换层析是用离子交换剂（具有离子交换性能的物质）作固定相，利用它与流动相中的离子能进行可逆的交换性质来分离离子型化合物的层析方法。 即溶液中的离子同离子交换剂上功能基团交换反应的过程。 凡在溶液中能够电离的物质通常都可以用离子交换层析进行分离。 离子交换层析以离子交换树脂作为固定相，树脂上具有固定离子基团及可交换的离子基团。当流动相带着组分电离生成的离子通过固定相时，组分离子与树脂上可交换的离子基团进行可逆变换；根据组分离子对树脂亲合力不同而得到分离。 一、基本原理 一、基本原理 蛋白质的等电点是进行离子交换的重要依据。蛋白质在pH高于其等电点的溶液中带负电荷，可被带正电荷侧链的阴离子交换树脂吸附；在pH低于其等电点的溶液中带正电荷，可被带负电荷侧链的阳离子交换树脂吸附。 蛋白质的洗脱：蛋白质是通过静电引力可逆结合在相应的离子交换树脂上，洗脱蛋白质（即打开蛋白质与离子交换树脂间离子键）的常用方法是加大反荷离子的浓度，常用的反荷离子是NaCl。随着树脂液相中Na＋、Cl－浓度的提高，它们与树脂侧链的结合力变强，可逆结合在树脂上的蛋白质会被竞争性地交换，从而被洗脱出来。结合力较弱的蛋白质首先被洗脱下来，从而达到分离纯化的作用。 带电荷量少，亲和力小的先被洗脱下来，带电荷量多，亲和力大的后被洗脱下来。 二、离子交换剂的种类 在惰性载体上引入带有电荷的活性基团即离子交换剂。 （一）按活性功能基团带电荷性质不同 阳离子交换剂 — 带负电荷，与阳离子交换 阴离子交换剂 — 带正电荷，与阴离子交换 二、离子交换剂的种类 （二）按载体种类不同 1.离子交换树脂：主要有聚苯乙烯树脂 苯乙烯+二乙烯苯 ? 聚苯乙烯 （单体）（交联剂） 二乙烯苯 交联度 = ———————— × 100% 苯乙烯 + 二乙烯苯 交联度大，网孔变小，大分子量的离子不能进入树脂颗粒内发生离子交换。 在不影响分离的情况下，以采用交联度较高的树脂为好，这样可以提高树脂对离子的选择性 。 *
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