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用实时荧光定量 PCR 检测石蜡标本中的麻风菌 DNA 以提高 PB 患者的确诊水平 温 艳 * 1 杨荣德 2 谭福跃 2 邢 燕 1 袁联朝 1 李桓英 1 1 首都医科大学附属北京友谊医院 北京热带医学研究所 100050 2 云南省文山州皮肤病防治所 663000 ? 1873 ，麻风病是由感染麻风杆菌造成的慢性传染病 , 挪威 A. Hansen. 从病人组织中发现麻风菌 ? 1943 ， 氨苯砜类药物用于麻风病的治疗 ? 1958 ， WHO 成立了麻风防治机构 , 全球麻风病控制 工作统一计划 ? 1981 ， WHO 推荐联合化疗方案 . 麻风病 麻风菌在人体感染的过程 卜 亚临床感染 无临床症状 自我痊愈 过程 MB PB LL BL B B BT TT 亚临床阶段 中间发展过程 临床变化 分型 目前麻风已经不再是一种灾难。 1985 年， 122 个国家中 520 万人感染此病； 1991 年 WHO 提出：到 2000 年消除麻风作为一个 公共卫生问题，指标为： 1/10000 ，世界范围总数少于 6000000 个病例； 2005 年，全球麻风病人降到 3000000 ，目前， 2000000 病人，这主要归功于 1980 年推广的 MDT 联合化疗。 存在问题 全球麻风病每年病人数徘徊不变，在过去 的 8 年，非洲、美洲和亚洲每年超过 200000 病 人，提示：麻风病的传播没有阻断，主要障碍 是在哪里发生和如何传播的信息不清楚；不能 有效的早期诊断病人。 麻风流行现状 Screening T est s S o u r c e No. Register ed Effective Date English Chinese Ⅰ Microscopy Diagno s tic Criterion for L eprosy 2008.01-16 WS 291-2008 2008-01-16 √ Slit Skin Smear Acid- fast staining Ministry of Public Health , Beijing √ Ⅱ Histo- pathology Skin Biopsy in Leprosy , D.S. Ridley , CIBA-GEIGY, Ltd., Basle, Switzerland Third Edition ,1990 1990 √ Ⅲ Leprosy ELISA IDRI , Seattle, WA98104 I- AS-005 2010-12- 0 6 √ √ Ⅳ a Whole Blood (IFN-r) Assay IDRI, Seattle , W A98104 I-AS-006 2006- 0 1- 0 5 √ √ b ELISPOT T-SPOT.TB, Oxford Immunotec TH-TB-UK-V4 2008-04 √ √ Ⅴ Nested-PCR Thomas M.S. , J. Clin. Microbiol , 1990 Wen Yan , Am. J. Trop. Med. Hyg. , 2013 p p . 1913-1917 i n press 2011-11- 0 6 √ √ Ⅵ Real Time PCR Truman RW , PLoS Negl Trop Dis, 2008 2(11):e328 2012-10-22 √ √ 麻风病早期诊断的 实验室技术平台 研究背景 ? 麻风病诊断：病理组织检查和抗酸染色结合临床检查； ? 病理学检查包括病原学检查抗酸菌（ AFB ）、组织中病理 变化； ? 然而常规病理学检查（ HE ）存在特异性、敏感性不足，特 别是对查菌阴性、病理表现为非特异性改变的患者。 ? PCR 技术用于皮损活检和组织液的检测，可检出新鲜未固 定组织标本中的微量麻风菌 DNA ，对早期和疑难病例的诊 断有潜在优势。 研究背景 ? 本实验室已经建立了 Nested PCR 和 real