沙门氏菌检验详细流程最新版.ppt

.精品课件. * * * GB 4789.4-2010食品安全国家标准食品微生物学检验 沙门氏菌检验 .精品课件. * 沙门菌概况 沙门菌是1885年由Salmon氏等在猪霍乱流行时，分离出的猪霍乱沙门菌，由于Salmon氏对本属细菌的发现贡献卓越，故定名为沙门菌属。 沙门菌属是肠杆菌科中最重要的病原菌。它是一群抗原结构、生化特性相似的革兰氏阴性杆菌。血清型繁多，目前已发现的沙氏菌有2500多个血清型和变种。我国发现的有250多个血清型。 .精品课件. * 沙门菌的分类 根据生化反应不同，分为2个种： 肠道沙门菌（Samonella enterica） ： Ⅰ 肠道亚种（subsp. enterica ） Ⅱ 萨拉姆亚种 （subsp. salamae ） Ⅲ 亚利桑那亚种（subsp. arizonae ） Ⅳ 豪顿亚种（subsp. houtenae ） Ⅵ 因迪卡亚种 （subsp. indica ） 邦戈尔沙门菌（Samonella bongori） Ⅴ .精品课件. * 沙门菌种和亚种的鉴别 项目 肠道沙门菌 邦戈尔沙门菌 Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅵ Ⅴ 卫矛醇 ＋ ＋ － － － ＋ 山梨醇 ＋ ＋ ＋ ＋ － ＋ 水杨苷 － － － ＋ － － ONPG － － ＋ － － ＋ 丙二酸盐 － ＋ ＋ － － － KCN － － － ＋ － ＋ 注：+为阳性 - 为阴性 .精品课件. * 沙门氏菌的血清分型 迄今为止沙门氏菌有 57个O抗原 116个H抗原 Vi抗原 被分成2500多个血清型。 Vi抗原 O抗原 H抗原 .精品课件. * 沙门氏菌命名与书写方式 目前的命名方法规定： 肠道沙门菌肠道亚种（亚种Ⅰ）给予专用名，并采用标本分离地址的地名。菌名的第一个字母需大写，且亚种Ⅰ的所用菌名不能用斜体。例如：肠道沙门菌鼠伤寒血清型应书写为Salmonella enterica subsp.enterica serotype Typhimurium，但在实际工作中，可简写为S. Typhimurium。 其他沙门氏菌均不给专用名，只在亚种数字名后直接书写抗原式，比如S.Ⅴ 66:z35:- 新的血清型名称的批准必须有巴斯德研究所、德国汉堡卫生研究所及美国CDC 3个实验室的一致同意。 .精品课件. * 沙门氏菌检验程序 .精品课件. * 目的：修复损伤的细菌细胞； 方法：25 g（mL）样品＋225 mL BPW的无菌均质杯中，以8 000 r/min～10 000 r/min均质1 min～2 min，或置于盛有225 mL BPW的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min。若样品为液态， 不需要均质，振荡混匀。 如使用均质袋，可直接 进行培养。于36 ℃±1 ℃ 培养8 h～18h。 前增菌 .精品课件. * 无菌均质袋 .精品课件. * 轻轻摇动培养过的样品混合物，移取1 mL, 转种于10 mL TTB 内, 于42 ±1 ℃培养18 ～24 h。同时, 另取1 mL, 转种于10 mL SC内, 于36 ±1 ℃培养18 ～24 h。 分别用接种环取增菌液1环, 划线接种于一个BS琼脂平板和一个XLD琼脂平板（或HE琼脂平板或显色培养基平板）。于36 ±1 ℃分别培养18 ～24 h (XLD琼脂平板、HE琼脂平板、显色培养基平板) 或40 h～48 h (BS琼脂平板)，观察各个平板上生长的菌落。 为了最大可能的检出沙门氏菌，原则上必须使用两种以上选择性分离培养基。 选择性增菌与分离 .精品课件. * 进口-SS 65.3 进口-SS 81.0 国产-SS 52.0 进口-HE 83.2 国产-HE 80.0 进口-XLD 83.0 国产-XLD 86.2 进口-BS 106.6 国产-BS 77.7 CHRO显色 68.4 国产-DHL 98.4 国产-WS 71.6 TSA（对照） 100.0 .精品课件. * 菌落为黑色有金属光泽、棕褐色或灰色, 菌落周围培养基可呈黑色或棕色；有些菌株形成灰绿色的菌落, 周围培养基不变。 国产BS 进口BS .精品课件. * 国产HE 进口HE 蓝绿色或蓝色, 多数菌落中心黑色或几乎全黑色；有些菌株为黄色, 中心黑色或几乎全黑色。 .精品课件. * 进口XLD 国产XLD 菌落呈粉红色，带或不带黑色中心，有些菌株可呈现大的带光泽的黑色中心， 或呈现全部黑色的菌落；有些菌株为黄色菌落，带或不带黑色中心 .精品课件. * 初筛微生物 菌落颜色 特异性灵敏度 沙门氏菌 紫色(直径约1mm) 89％