动物微生物与免疫技术任务十病毒的血凝与血凝抑制试验技能点26病毒的血凝抑制试验.pptVIP

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2021-03-24 发布于北京
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动物微生物与免疫技术任务十病毒的血凝与血凝抑制试验技能点26病毒的血凝抑制试验.ppt

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仪器及材料 pH7.2PBS或生理盐水、1％鸡RBC悬液、新城疫病毒液新城疫待检血清新城疫标准阳性血清、新城疫标准阴性血清微量血凝板（V型96孔）、微量移液器、吸头微型振荡器、温箱、注射器 4单位病毒(4V)的配制被检血清的制备静脉或心脏采血（不加抗凝剂），血液凝固后自然析出或离心得到的淡黄色液体即为被检血清。生理盐水对照孔红细胞成明显钮扣状沉到孔底时判定结果。只有当阴性血清与标准抗原对照的HI滴度不大于2log2，阳性血清与标准抗原对照的HI滴度与已知滴度相差在1个稀释度范围内，并且所用阴、阳性血清都不发生自凝的情况下，HI试验结果方判定有效。 HI试验结果及规律血清的HI价（血凝抑制滴度）能完全抑制红细胞凝集的血清最大稀释倍数称为血清的血凝抑制滴度或血清的血凝抑制效价。常用nlog2表示。 HI试验成功的关键环节正确使用微量移液器吸头不能混用悬滴加样混匀要彻底时间和温度合适 4单位病毒配制正确 * 技能点26 病毒的血凝抑制试验技能点26 病毒的血凝抑制试验 Ag、Ab不对应 RBC 抗体红细胞凝集（HA现象） RBC v v v v v RBC RBC RBC RBC RBC RBC RBC RBC v 血凝性病毒血凝素纤突 v v v v Ag、Ab对应 RBC 红细胞不凝集（HI现象） RBC v v RBC RBC 试验原理 HA价除以4即为4V抗原的稀释倍数。假设HA价为256，则4V抗原的稀释倍数为64，吸取1mL抗原加入63mL生理盐水即为4V抗原。振荡混匀，室温即20℃～25℃下静置40min后观察结果。若环境温度太高，放4℃静置60min。生理盐水对照孔红细胞成明显钮扣状沉到孔底时判定结果。 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 1%RBC悬液轻叩反应板使反应物混合均匀，室温即20℃～25℃下静置不少于30min，4℃静置不少于60min。 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 50 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 －　－弃25 21 2 2 23 24 25 26 27 28 29 210 病毒盐水对照对照 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 25 －生理盐水被检血清血清稀释倍数 4V 12 11 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 孔号操作术式（微量法，单位ul）注意：除被检血清外，标准阳性和标准阴性血清各做一排。结果判定的条件完全不凝集：红细胞呈明显钮扣状沉到孔底完全凝集：红细胞呈伞状均匀分布于孔底不完全凝集：介于两者之间请对此试验结果进行抗体滴度报告