米氏常数测定方法计划总结计划.docxVIP

精品文档 精品文档 蚀 螈芁 蚈薆 蒆膆 蚃羇 袇蒂 螅袄PAGE PAGE13 精品文档 PAGE 酶活米氏常数实验 一、实验前准备 1、24孔板洗净烘干，准备足够枪头。 2、准备催化剂，在光下呈透明状为分散性较好，否则用超声清洗器（位于化学间）超 声分散5min，期间准备底物（如TMB 或者ABTS），浓度依照自己实验的要求定（10mg/mL 或5mg/mL），一般1mL足够用，可在 1.5mL 离心管中溶解。TMB（外间冰箱上层）溶于 DMSO（二甲亚砜，位于化学间王春雨的柜子里） ，ABTS（与TMB放在一起）溶于二次水。 3、将缓冲液、催化剂、底物、 H2O2、200μL和10μL移液枪、50μL排枪（位于称量处 上方模拟酶专用枪的柜中） 、96孔板、24孔板、卷纸一起放入纸盒中，放到对面酶标仪前， 开空调定室温（25℃，提醒其他人随手关门），24孔板中其中一排加入适量 H2O2（每孔1mL 左右，注意避光，可在板上盖一张卷纸），将缓冲液、催化剂、底物放实验台上， 静置0.5-1h。 4、记录本上提前写好实验的加样顺序： 催化底物 TMB（或ABTS）的酶促动力学过程加样顺序：① 200μL缓冲液 ②10μL催 化剂 ③底物TMB（ABTS）(0，0.5，1，2，4，6，8，10μL)④32μLH2O2（排枪加） 催化底物 H2O2的酶促动力学过程加样顺序：① 200μL