咪唑安定对豚鼠噪声性聋的保护作用.docVIP

时间： TIME \@ yyyy年M月d日 2021年3月13日 学海无涯 页码：第 PAGE 1页共 NUMPAGES 1页 PAGE PAGE 1 咪唑安定对豚鼠噪声性聋的保护作用 随着现代医学的发展，医用电钻在耳科手术中应用越来越广泛，但耳科电钻噪声引起的内耳听力损伤仍未引起足够的重视。早在1976年KYLEN和ARLINGER通过人的颞骨和尸体颅骨研究证实耳科电钻在术侧耳蜗的噪声为100dB，这种噪声可以导致高频感音神经性听力下降。噪声可对人的听觉系统产生特异的损伤作用，导致听阈升高，严重的则引起噪声性聋。噪声对听觉系统的损伤除造成代谢性损伤外，同时产生机械损伤，两者均导致大量活性氧(reactive oxygen species, ROS)的产生，ROS在噪声引起的耳蜗损害中起着十分重要的作用[1]。ROS清除剂能减轻噪声引起的听力损害[2]。CHUNG[3]研究表明,全身麻醉药异氟醚、氟烷、戊巴比妥能够对小鼠噪声引起的听力损害起到保护作用，推测其机制可能与活性氧的产生减少有关。本研究通过检测豚鼠血清中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)活性、丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量和耳蜗中ROS含量来研究咪唑安定对噪声性聋的防护作用及其可能作用机制。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物及分组 　　选用耳廓反射正常的健康雄性杂色豚鼠40只，体重250～300g，随机分为正常对照组(C组)、咪唑安定组(M组)、生理盐水组(S组)和噪声性聋组(D组)，每组10只。正常对照组不接触噪声，只注射咪唑安定；咪唑安定组接受噪声暴露且注射咪唑安定；生理盐水组接受噪声暴露，注射生理盐水；噪声性聋组单纯接触噪声。 　　1.2 噪声条件 　　自制噪声箱，为自由声场的混响箱，背景噪声　　1.3 给药方法 　　咪唑安定组于噪声暴露前24h、噪声暴露前即刻及噪声暴露中1h肌肉注射咪唑安定0.1mg/kg(购自江苏恩华药业有限公司)。正常对照组给予注射咪唑安定，其时间与剂量同咪唑安定组；生理盐水组在相同时间肌肉注射等体积的生理盐水。 　　1.4 听性脑干反应(auditory brainstem response, ABR)阈测试 　　所有动物均于噪声暴露前及暴露后立即测ABR阈值(丹麦产Keypoint)。10g/L氯胺酮(0.5mg/kg)腹腔注射麻醉后，将气导耳机紧贴豚鼠耳廓，分别测定左右耳，记录电极置于豚鼠颅顶，参考电极置于刺激侧耳垂，地线绑于足部。刺激声为短声(click)，强度范围为0～120dB SPL，重复率为19.4次/min，平均叠加次数1000次，滤波带宽100～5000Hz。每只豚鼠以能引出明确的可重复III波的最小刺激声压级作为阈值。 　　1.5 血清SOD活性和MDA含量测定 　　在噪声暴露前和噪声暴露第3天处死前，取豚鼠血约1mL，3000r/min离心30min，取血清-80℃冻存，待测。使用MDA、SOD测定试剂盒(南京建成生物工程研究所提供)，按操作说明测定血清SOD活性和MDA含量。　　　1.6 耳蜗组织ROS含量的测定 　　噪声暴露第3天ABR测试后，立即将所有豚鼠断头处死。迅速取出双侧听泡，置于4℃ PBS液中，在显微镜下去除蜗壳，取出基底膜连带蜗轴，立即置液氮中，24h后于-80℃冰箱保存，用于耳蜗组织ROS含量的测定。豚鼠断头处死到将耳蜗组织液氮冷冻的时间平均为15min，每只之间相差不超过3min。 　　1.6.1 耳蜗组织匀浆液的制备 　　自-80℃冰箱取出保存的豚鼠双侧耳蜗，置于微型玻璃匀浆器中，先加入0.5mL匀浆介质，于冰上研磨15min后倒入1mL的EP管中，再用0.5mL匀浆介质冲洗玻璃匀浆器后倒入EP管中，于低温、4000r/min离心15min，取上清用于ROS含量的测定。　1.6.2 耳蜗组织ROS含量测定 医学类论文发表 　　使用ROS测定试剂盒测定(南京建成生物工程研究所提供)。最佳取样量定为2%，抑制率为21.35%，符合抑制率在20%～50%的要求。将耳蜗组织匀浆用生理盐水稀释成20mL/L，取0.2mL测定。 　　1.7 统计学处理 　　数据处理应用SPSS13.0 统计软件包，所有数据经过正态性检验符合正态分布，数据以±s表示。噪声暴露前后组内比较采用配对t检验分析，组间比较采用完全随机设计的单因素方差分析，两两比较采用SNK-q检验，P　　2 结 果 　　2.1 各组ABR阈移 　　噪声暴露前，4组ABR阈值之间比较均无显著性差异(P0.05)。 正常对照组和咪唑安定组动物噪声暴露后与噪声暴露前ABR阈值无显著性差异(P0.05)，而生理盐水组、噪声性聋组噪声暴露后ABR