天然产物分离纯化方法.pptx

第三章、天然产物的分离与精制;1、冷却、过滤 浓缩后过滤、冷却、过滤 特点：适应于溶解度对温度敏感的物质，操作容易，成本低，一般用于杂质的去除;3、改变水溶液pH值 酸提碱沉法，碱提酸沉法,等电点法 特点：用于酸性、碱性物质及蛋白质，操作成本很低，需考虑pH值对产品的影响，对于极性大的物质沉淀不完全;4、添加沉淀剂 酸性或碱性化合物还可通过加入某种沉淀试剂使之生成水不溶性的盐类沉淀等析出。如下表：;例1： 见书P62：益母草碱的纯化;6、浸膏（浓缩液）分别用极性从小到大的溶剂萃取;（4）各种萃取方法：;7、pH梯度萃取;8、利用离子交换剂对水提取物进行粗分（可不经过浓缩）;3）离子交换色谱定义 离子交换色谱(ion exchange chromatography，IEC)：利用离子交换剂作为固定相，根据荷电溶质与离子交换剂之间静电相互作用力的差别进行溶质分离的方法。;（2）离子交换剂的分类及选择 1）按骨架分类 ①合成树脂骨架的多孔弹性颗粒 苯乙烯衍生物、苯乙烯和二乙烯苯共聚，树脂颗粒孔径小，机械强度大，可承受高的流速，易引起蛋白质的变性，常用于分离小分子;1)预处理: ① 清水浸泡 80%~90%乙醇浸泡24小时 40~50℃热水浸泡2小时、洗涤数次 ④ 4倍树脂量的2mol/L盐酸浸泡2小时，水洗直中性 4倍树脂量的2mol/L氢氧化钠浸泡2小时，水洗直中性，抽干备用， ⑥ 转变为所需类型。;3）保存 阴凉处。短期可存放于1mol/L盐酸或氢氧化钠溶液中。长期存放可加入适量防腐剂封存。树脂长霉可用1%甲醛浸泡1小时后进行再生处理。 4）装柱 粗细分布均匀、无气泡、无断层。 5）上样 初分离可达到饱和状态，细分离上样量为树脂总吸附量的1%-5% 6）清洗 除杂 7）洗脱 增加洗脱液的离子强度或改变pH值。 阶段洗脱法，梯度洗脱法。;（4）工艺参数 树脂的选择 上样液的pH值、流速 洗脱液的种类、pH值、流速、量;9、利用大孔吸附树脂树脂对水提取物进行粗分（可不经过浓缩）;（1）吸附的产生 表面;（2）大孔吸附树脂的分类及使用范围 非极性大孔吸附树脂：不带任何功能基，疏水性较强，适合于从极性溶剂中吸附非极性物质 中等极性大孔吸附树脂：含酯基的吸???树脂，其表面兼有疏水和亲水两部分。既可由极性溶剂中吸附非极性物质，又可由非极性溶剂中吸附极性物质。 极性大孔吸附树脂：含酰胺基、氰基、酚羟基等含氮、氧、硫极性功能基的吸附树脂，他们通过静电相互作用吸附极性物质。适宜于从非极性溶剂中吸附极性溶质;（4）吸附树脂的筛选: 吸附量的测定、解析率的测定;?（6）中药复方采用大孔树脂吸附工艺的特点： ????（1）可提高中药制剂中有效成分的相对含量：仅从固形物收率一项看，水煮法收率一般为原生药量的30％左右，水提醇沉法收率一般为原生药量的15％左右，而用大孔树脂技术仅为原生药的?2％～5％左右。可以克服传统中成药“粗、大、黑”的缺点。同时可节约成品的包装成本。 ????（2）产品不吸潮：水煎液中大量的糖类、无机盐、粘液质等强吸潮性成分，因不被大孔树脂吸附而除去，所以在作固体制剂时吸潮性小，易于操作和保存。 ???（3）缩短生产周期：免去静置沉淀、浓缩等耗时多的工序，节约生产成本。 ;10、聚酰胺吸附色谱法（可不经过浓缩） 聚酰胺化学性质：高分子聚合物质，不溶于水、甲醇、乙醇、乙醚、氯仿及丙酮等有机溶剂，对碱较稳定，对酸尤其是无机酸稳定性较差，可溶浓盐酸、冰醋酸及甲酸。 吸附原理：;影响吸附力的因素： 形成氢键数目：形成氢键的基团数目越多，则吸附能力越强;二 、精细分离方法;?2）、 Sephadex LH-20 的原理 Sephadex LH-20的分离原理主要有两方面：以凝胶过滤作用为主，兼具反相分配的作用（在反相溶剂中）。因为凝胶过滤作用，所以大分子的化合物保留弱，先被洗脱下来，小分子的化合物保留强，最后出柱。如果使用反相溶剂洗脱， Sephadex LH-20对化合物还起反相分配的作用，所以极性大的化合物保留弱，先被洗脱下来，极性小的化合物保留强，后出柱。如果使用正相溶剂洗脱，这主要靠凝胶过滤作用来分离。 ;4）、 Sephadex LH-20 样品的处理和洗脱溶剂的选择。样品极性大，采用反相溶剂洗脱（甲醇－水），样品用最少体积的甲醇－水溶解，过滤后，湿法上样（一定要滤！要是把Sephadex LH-20 堵了，就得将Sephadex LH-20 的柱头部分弃去）。如果样品极性小，则选用正相溶剂洗脱（氯仿－甲醇），样品用最少体积的氯仿－甲醇溶解，过滤后，湿法上样。 ;5）、 Sephadex LH-20的操作步骤 ;?6）、分离的技巧 ;2、活性炭吸附法 1）概述： 活性炭是一种用