分子水平上的同源重组.pptxVIP

第五章分子水平上的同源重组;1.同源重组（homologous recombination） 同源重组是由两条同源区的DNA分子，通过配对、链的断裂和再连接，而产生片段交换的过程。 以E.coli的同源重组为例，了解同源重组机制的Holliday模型。;2. 同源重组机制的Holliday模型 ①两个同源DNA排列整齐 ②DNA断裂，产生单链区 ③链入侵，产生异源双螺旋DNA ④Holliday联结体的形成 ⑤Holliday联结体的剪切 ?补丁产物(patch product) ?剪接产物(splice product);2. 同源重组机制的Holliday模型 ①两个同源染色体DNA排列整齐 ②DNA断裂，产生单链区;2. 同源重组机制的Holliday模型 ③链入侵，产生异源双螺旋DNA ④Holliday联结体的形成;2. 同源重组机制的Holliday模型 ④Holliday联结体的形成;2. 同源重组机制的Holliday模型 ⑤Holliday联结体的剪切 ?剪接产物(splice product) ?补丁产物(patch product);2. 同源重组机制的Holliday模型 ①两个同源染色体DNA排列整齐 ②DNA断裂，产生单链区 ③链入侵，往往产生异源双螺旋DNA ④Holliday联结体的形成 ⑤Holliday联结体的剪切;3.RecBCD蛋白的结构与功能 3.1结构;3.RecBCD蛋白的结构与功能 3.2功能 ?RecBCD 核酸酶和解旋酶 ATP ?RecB 3′→5′解旋酶和核酸酶活性 ?RecD 5′→3′解旋酶和核酸酶活性 ?RecC 识别DNA的chi位点;3.3 RecBCD的作用机制 ①RecBCD结合于DNA断裂末端，向chi位点方向打开双链 ②RecB沿3′→5′降解单链DNA， RecD沿5′→3′降解单链DNA ③ RecC识别chi位点，RecD丧失活性， RecB沿5′→3′降解单链DNA，而不再沿3′→5′降解单链DNA;4.RecA蛋白的功能 4.1促使链的入侵 ?主要位点结合单链DNA ?次要位点结合双链DNA ?链交换;5.RuvAB的功能 5.1促进分支移动 ?RuvA-RuvB结合到联结体 ?RuvB促使DNA分支移动;6.RuvC的功能 6.1剪切Holliday联结体 ?RuvC在同一方向的同源DNA链打开缺口 5′A/T-T-T-G/C3′ ?DNA连接酶连接缺口;7.总结 同源重组（homologous recombination） 同源重组机制的Holliday模型 RecBCD蛋白的结构与功能 RecA蛋白的功能 RuvAB的功能 RuvC的功能;作业 1. 在大肠杆菌中参与DNA同源重组的蛋白有哪些？他们具有什么功能？;2. 同源重组机制的Holliday模??? ①两个同源DNA排列整齐 ②DNA断裂，产生单链区 ③链入侵，产生异源双螺旋DNA ④Holliday联结体的形成 ⑤Holliday联结体的剪切 ?补丁产物(patch product) ?剪接产物(splice product);3.RecBCD蛋白的结构与功能 3.2功能 ?RecBCD 核酸酶和解旋酶 ATP ?RecB 3′→5′解旋酶和核酸酶活性 ?RecD 5′→3′解旋酶和核酸酶活性 ?RecC 识别DNA的chi位点;3.3 RecBCD的作用机制 ①RecBCD结合于DNA断裂末端，向chi位点方向打开双链 ②RecB沿3′→5′降解单链DNA， RecD沿5′→3′降解单链DNA ③ RecC识别chi位点，RecD丧失活性， RecB沿5′→3′降解单链DNA，而不再沿3′→5′降解单链DNA