蛱蝶科遗传多样性及分子系统发育研究.docVIP

优选 优选 PAGE / NUMPAGES 优选 蛱蝶科遗传多样性及分子系统发育研究 【摘要】：蛱蝶科Nymphalidae隶属鳞翅目Lepidoptera凤蝶总科Papilionoidea,为蝶类中较大的科,具有很高的观赏价值和经济价值,但其幼虫绝大多数专以植物体为食料,虫口密度大,是粮食作物、果树、蔬菜、纤维作物、林木、竹类、药用植物以及绿肥牧草等的主要害虫。对蛱蝶科物种的分类研究由来已久,早期主要以形态特征为依据进行分类,近来,有学者采用分子生物学的方法来重建蛱蝶科部分物种的系统发育关系。然而,由于蛱蝶科物种形态多变且生活史各不相同,该科物种的系统发育关系一直比较混乱,成为昆虫分类学家争论的焦点。此外,由于蛱蝶科内各亚科、族及属间的系统发育关系并未澄清,以致无法阐明诸多研究结果的进化意义。研究该科物种的遗传多样性和系统分类学关系不仅具有理论意义,也对其生物多样性保护和农业植保实践中的防治具有较为重要的应用价值。RAPD(随机扩增多态性DNA)技术是1990年由Willianms和Welsh同时提出的一项DNA分子水平的多态性检测技术,因其简捷、成本低且信息含量丰富,被广泛用于生物类群种属分类鉴定、遗传图谱构建、物种亲缘关系和种群遗传学等领域的研究。该方法很快被昆虫学家所认可,广泛用于种群遗传学和系统发育研究。线粒体DNA基因和核基因的序列分析是重建物种系统发育关系及进化研究的有效分子标记,早已被广泛用于研究种群结构、基因缺失、杂交后代、生物地理学和系统发生关系。本文采用RAPD技术探讨了蛱蝶科闪蛱蝶亚科大紫蛱蝶和粉蝶科菜粉蝶不同地理种群之间的遗传多样性;采用线粒体DNA细胞色素b(Cytb)、细胞色素c氧化酶亚基Ⅰ(COI)和核延长因子(EF-1α)基因作为分子标记,对我国闪蛱蝶亚科、蛱蝶亚科、线蛱蝶亚科和蛱蝶科部分物种的系统发育关系进行初步的探讨;结合GenBank下载序列和自测序列(DataⅠ),采用NJ、ML和Bayesian方法分别构建蛱蝶科部分物种系统发育树,并将后翅臀角斑、眼状斑和后翅外缘突起这3个形态性状标记在ML系统发育树上,对这3个形态性状进行进化分析,为更好地开展蛱蝶科系统分类学研究、生物多样性保护和防治提供了分子生物学的实验依据。此外,基于自行测定的和GenBank收录的线粒体COI基因和核EF-1α基因序列(DataⅡ)蛱蝶科亚科间的系统发育关系,结合眼蝶亚科、蛱蝶亚科和Dynaminealexaen物种的化石资料,进一步计算出蛱蝶科所有12个亚科间的首次分歧时间。本文的研究内容主要包括以下几个方面:1.主要采用实验室保存的干标本,比较了酚-氯仿法和饱和NaCl法提取蝶类干标本胸部、腹部和中后足肌肉基因组DNA的效果及对RAPD-PCR和线粒体Cytb、COI基因及核EF-1α基因部分序列扩增结果的影响。研究结果表明:两种DNA提取方法从干制标本中后足肌肉提取的基因组DNA带型整齐,无拖尾;两种方法得到的基因组DNA均适用于RAPD-PCR扩增,而酚-氯仿法得到的基因组DNA在随后的线粒体Cytb、COI基因及核EF-1α基因部分序列扩增中效果更好。2.采用RAPD技术分析了大紫蛱蝶三个地理种群的遗传多样性,并以同属的黑紫蛱蝶指名亚种及近缘属种黑脉蛱蝶指名亚种为外群,探讨了它们之间的亲缘关系及RAPD技术在蛱蝶属种间的适用性。经筛选的10个随机引物对供试的58只蝶类标本共产生200条扩增谱带,这些谱带具有明显的属、种间多态性。根据Nei’s遗传距离,分别用UPGMA和NJ法对其进行聚类,构建了分子系统树。聚类结果表明:大紫蛱蝶三个地理种群亲缘关系的远近与地理距离存在一定的相关趋势,某某种群与某某种群间存在一定的基因交流。聚类结果与Nei’s遗传距离均表明:大紫蛱蝶与黑紫蛱蝶的亲缘关系较近,而黑脉蛱蝶与上述两物种的亲缘关系较远。聚类图所显示物种间亲缘关系与传统的形态分类结果基本一致。3.采用12条10bp的随机引物,对菜粉蝶不同种群共75个个体的基因组DNA进行扩增,共产生143条清晰、稳定的谱带。Nei’s遗传距离表明菜粉蝶5个种群间的遗传距离差异较小。用UPGMA和NJ两种聚类方法对菜粉蝶5个种群所有个体构建聚类图,除某某种群和某某种群的位置有所不同外,聚类结果基本一致。UPGMA结果显示:代县种群和夏县种群最先相聚,随后这两个种群与某某种群聚为一支,某某种群再与上述三个种群相聚,某某种群与其余四个种群亲缘关系最远。菜粉蝶种群间遗传距离与其地理距离之间不存在相关性。4.测定了重要林业害虫闪蛱蝶亚科11属16种蝶类的线粒体细胞色素氧化酶Ⅰ基因的部分序列,并结合由GenBank下载的该亚科4种蝶类的相应序列进行分析,探讨了闪蛱蝶亚科各属间的系统发育关系。以玉杵带蛱蝶,白斑眼蝶,忘忧尾蛱蝶和白带螯蛱蝶