十二烷基硫酸钠毛细管凝胶电泳法(CE-SDS法)标准操作规程SOP.docxVIP

十二烷基硫酸钠毛细管凝胶电泳法〔 CE-SDS 法〕 标准操作规程 类别 工作标准文件 文件编号 XXXXX 版本号 V01 页码 共页 执行日期 年 月 日 〔制止复印〕 审批页 — 起草人 审核人 审核人 批准人 部门 分析研究部 分析研究部 分析研究部 质量保证部 姓名 签名 日期 年月日 年月日 年月日 年月日 颁发部门：质量保证部 分发部门：分析研究部 拷贝号： NO. / 文件变更历史 版本号 执行日期 变更原因、根据及变更内容 V00 2019年 03月 10日 新起草 目录 TOC \o "1-5" \h \z 目的 4 范围 4 定义 4 环境、安康和平安 4 培训 4 职责 4 程序〔内容〕 4 原理 4 实验材料 4 操作步骤 5 结果分析 9 断定标准 9 考前须知 9 相关文件 10 参考文献 10 流程图 10 11附 录 10 \o "Current Document" 十二烷基硫酸钠毛细管凝胶电泳法〔 CE-SDS 法〕测定记录 1 \o "Current Document" 十二烷基硫酸钠毛细管凝胶电泳法〔 CE-SDS 法〕测定记录 〔适用于多个样品 〕 1 目的 标准十二烷基硫酸钠毛细管凝胶电泳法〔 CE-SDS 法〕检验的操作过程。 范围 本规程适用于常规十二烷基硫酸钠毛细管凝胶电泳检验，涉及到蛋白质纯度 相关指标的测定。 定义 CE-SDS：十二烷基硫酸钠毛细管凝胶电泳。 环境、安康和平安 复原电泳中使用的巯基乙醇为挥发性液体，具有较强烈的刺激性气味，会刺 激眼睛、呼吸系统和皮肤，吞食有害，与皮肤接触有毒，取液时穿戴适当的防护 服、手套和护目镜或面具。如不慎与眼睛接触后，请立即用大量清水冲洗并征求 医生意见。该液体对水体环境能产生长期污染等不良影响，切勿倒入下水道，应 倒入废液桶，由专业部门回收。与空气混合、受热、明火可爆，如其燃烧可用二 氧化碳、干粉类灭火剂。储存库房应通风低温枯燥，与氧化剂、食品分开储运。 培训 培训部门：分析研究部。 培训对象：分析研究部相关人员。 培训方式和时数：自学， 0.5 小时。 考核方式：问答。 职责 质量保证部：负责监视本文件的执行。 分析研究部：负责严格执行本规程规定。 程序〔内容〕 原理 该方法是指以弹性石英毛细管为别离管道，以高压直流电场为驱动力，通过 目的蛋白在含有胶的溶液中的迁移速率不同而得到别离，较小分子量的分子迁移 速度更快那么其迁移时间短，较大分子的迁移速度慢那么其迁移时间更长。该方法主 要能检测分子量在 10kDa 以上的降解片段。 实验材料 试药与试液 超纯水：电阻率不低于 18.2MΩ· c，m本方法所有试液均用超纯水配制。 ：Beckman消费，货号 390953，该试剂盒中包含 SDS- MW 凝胶别离缓冲液、 SDS-MW 样品缓冲液〔样品稀释液〕、酸性清洗液〔0.1mol/L 盐酸溶液〕、碱性清洗液〔 0.1mol/L 氢氧化钠溶液〕 、内标物质〔 10kDa Internal Standard〕。也可采用北京博思雅生化技术研究院消费的 SDS试剂盒，货号 BSYK018， 该试剂盒中包含 CE-SDS Gel Buffer 、CE-SDS Sample Buffer〔样品稀释液 〕。也可 采用同类型其它品牌的商品化试剂盒。 烷基化溶液 〔0.25mol/L 碘乙酰胺溶液〕：称取约 0.046g碘乙酰胺，参加 1ml 超纯水溶解混匀，可于 2~8℃避光保存 7 天。 巯基乙醇。 系统适用性样品： 如无特殊规定， 应采用经特殊处理后的系统适用性专用样 品〔处理方法见各工程下规定〕 ；也可选用相应原研药或各工程自制工作对照品。 仪器与用具 毛细管电泳仪： AB SCIEX 公司 PA 800plus或 CESI 8000 Plus。 毛细管卡盒：适用于 中毛细管电泳仪的毛细管卡盒。 毛细管：非涂层 -熔融石英毛细管〔内径 50μm〕，切割至总长为 30.2cm，高 分辨率方法有效别离长度为 20cm，高效方法有效长度为 10cm。 孔塞：孔塞大小 8〔100μm×800μm〕。 其他：CE 通用样品瓶、蓝色橡胶通用样品瓶瓶盖、 200μl微量管〔内插管〕、 移液器、水浴锅〔或金属浴〕 、台式离心机、离心管、超滤管。 操作步骤 供试品制备 供试品稀释 〔1〕空白对照： 取当次检测供试品对应的缓冲液 〔如原液缓冲液或制剂缓冲液〕 ， 分别用稀释液〔SDS样品缓冲液〕进展稀释〔稀释倍数同供试品〕，作为空白对照。 〔2〕系统适用性：取各工程下规定的系统适用性样品，用稀释液〔 SDS-MW 样品 缓冲液〕稀释至终浓度约为 1.0mg/ml。 〔3〕