低直链淀粉含量基因Wxmp、Wxmq和Wxmw分子标记检测方法.docxVIP

附 录 A （规范性） 低直链淀粉含量基因Wxmp、Wxmq和Wxmw分子标记检测方法 A.1 原理 低直链淀粉含量突变基因Wxmp、Wxmq和Wxmw是在Wxb基因的第4、第5和第6外显子发生了单碱基突变（图A.1）。仅在第4外显子第53位碱基发生G-A突变的为Wxmp基因，同时在第4外显子第53位碱基发生G-A突变和第5外显子第52位碱基发生T-C突变的为Wxmq基因，仅在第6外显子第62位碱基发生A/C突变的为Wxmw基因。利用四引物扩增受阻突变体系PCR技术可针对第4和第6外显子的变异位点进行分子标记检测；利用成对引物可针对第5外显子的变异位点进行PCR扩增和序列分析，根据突变位点的有无和类型，来判断是否含有突变基因Wxmp、Wxmq和Wxmw。 图A.1 Wx基因的结构及Wxmp、Wxmq和Wxmp基因突变位点示意图 A.2 仪器设备 高速冷冻离心机、PCR扩增仪、超纯水系统、组织研磨仪、琼脂糖凝胶电泳系统及制胶附件、凝胶成像系统、微量可调移液器（2 uL、10 uL、100 uL、1000 uL）。 A.3 试剂与溶液 A.3.1 DNA提取试剂 十六烷基三甲基溴化铵、三氯甲烷、异戊醇、异丙醇、乙二胺四乙酸二钠、三羟甲基氨基甲烷、盐酸、氢氧化钠、氯化钠。 A.3.2 PCR扩增试剂 DNA、引物、dNTP、Taq酶、10×PCR缓冲液、超纯水。 A.3.