紫外-可见分光光度法培训.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * 第三节 应用239 一、定性分析 二、定量分析 定性鉴别 纯度检查和杂质限量测定 单组分的定量方法 多组分的定量方法 * 一、定性分析 （一）定性鉴别 定性鉴别的依据→吸收光谱的特征 吸收光谱的形状 吸收峰的数目 吸收峰的位置（波长） 吸收峰的强度 相应的吸光系数 * 吸收光谱（吸收曲线）： 以吸光度A为纵坐标，波长λ为横坐标，绘制的λ~A曲线。 特征：峰 曲线上比左右相邻处都高的一处； ?max 吸收程度最大所对应的 ?（曲线最大峰处的 ?） 谷 曲线上比左右相邻处都低的一处； ?min 最低谷所对应的 ?； 肩峰 ?sh 介于峰与谷之间，形状像肩的弱吸收峰； 末端吸收 在吸收光谱短波长端所呈现的强吸收而不呈峰形的部分。 * 续前 1．对比吸收光谱的一致性239 同一测定条件下，波长和浓度一样, 与标准对照物谱图或标准谱图 进行对照比较 2．对比吸收光谱的特征值：比较最大吸收及吸收系数的一致性。 * 续前 3．对比吸光度或吸光系数的比值的一致性： 例： 药典中采用此法鉴别不同的化合物：化合物中不只一个吸收峰，可在不同吸收峰处（或峰与谷）测得吸收度的比值。不受浓度和厚度的影响，所比较的是物质的特性。 * 续前 （二）纯度检查和杂质限量测定 1．纯度检查（杂质检查） 1）峰位不重叠： 找λ→使主成分无吸收，杂质有吸收→直接考察杂质含量 如乙醇和环己烷中含少量苯，苯在256nm处有吸收，而乙醇和环己烷在此波长无吸收。（0.001％） 2）峰位重叠： 主成分强吸收，杂质无吸收 / 弱吸收→与纯品比较，E↓ 杂质强吸收 主成分吸收→与纯品比较，E↑，光谱变形 * 续前 2．杂质限量的测定： 例：肾上腺素中微量杂质——肾上腺酮含量计算 2mg/mL -0.05mol/L的HCL溶液，λ＝ 310nm下测定 规定 A310≤0.05(在310nm处的百分吸光系数为435) 即符合要求的杂质限量≤0.06% * 例子：用峰谷吸收度比值控制杂质的限量 碘解磷定杂质有：顺式异构体、中间体等，在碘解磷定最大吸收波长294nm处无吸收，但在其吸收谷262nm处有吸收,利用峰谷吸收度比值作为杂志的限量检查。纯品碘解磷定A294/A262=3.39 如有杂质，其值小于3.39，标准规定吸收度比值应在3.31～3.39范围内。 * 二、定量分析 （一）单组分的定量方法 1．吸光系数法 2．标准曲线法 3．对照法：外标一点法 * 续前 1．吸光系数法:在规定波长处测定吸光度,再用吸收系数进行计算.(通常大于100) * 练习 例：维生素B12 的水溶液在361nm处的百分吸光系数为207，用1cm比色池测得某维生素B12溶液的吸光度是0.414，求该溶液的浓度（见书P209例1） 解： * 练习 例2：精密称取B12样品25.0mg，用水溶液配成100ml。精密吸取10.00ml，又置100ml容量瓶中，加水至刻度。取此溶液在1cm的吸收池中，于361nm处测定吸光度为0.507，在361nm处的百分吸光系数为207，求B12的百分含量？ 解： * 练习 例3： 解： * 续前 2．标准曲线法 * 示例 芦丁含量测定 0.710mg/25mL * 续前 3．对照法：外标一点法 注：当样品溶液与标准品溶液的 稀释倍数相同时 * 练习 例： 维生素B12的含量测定 精密吸取B12注射液2.50mL，加水稀释至10.00mL；另配制对照