电镜技术及超薄切片技术研究生医学.pptxVIP

电子显微镜室简介 我室的电镜型号和性能如下： H-600A型透射电镜，购于1989年，最大点分辨率为0.36nm,有效放大倍数达30万倍。 H-7500型透射电镜，购于2004年，最大点分辨率为0.24nm,有效放大倍数达60万倍。 S-3000N型扫描电镜，购于2004年，有效放大倍数达30万倍。; 1924年，法国物理学家Broglie提出了“电子与光一样， 具有波动性“的假说，并计算出电磁波长为0.005nm. 1926年，德国科学家Busch发现了带电粒子在电场或磁 场中偏转聚焦的现象，类似于光线通过透镜可被聚焦一样。 1928—1931年间，德国年轻的大学生Ruska测量了磁透 镜的聚焦特性，并开展了电子放大成像的研究，终于在1938 年成功研制了世界上第一台真正的电子显微镜，放大倍数为 1200倍，被誉为电子显微镜之父。，并在1986年获得诺贝尔 奖。 20世纪50年代初到60年代末期，电镜发展很快，从性能 到构造都得到很大的改进，特别是分辨本领得到大幅度提高， 达到1nm左右，到80年代的点分辨率已接近0.1nm，最新研制 的超高压透射电镜的点分辨率可达0.005nm。;电镜的基本类型：; ; 可以这么说，显微镜分辩本领是由其产生的衍射图中央亮斑半径 D（分辨能力） 而定： 阿贝公式： D =当光的波长为 λ= 500nm = 0.5μm介质折射率 N（油） = 1.5物体与物镜所形成夹角的半数 α90o 中央亮斑的半径 D = 200nm = 0.2μm ;分辨本领测算： ;瑞利准则;运动着的电子所产生电磁波长为：  λ= (n m) 如 V = 50000 v  则 λ = 0.005 nm= 0.000005μm 是光的λ=500nm 的10万分之一， 大大减少了衍射光斑D的值。; 光学显微镜与电子显微镜在工作原理上的比较： 光学显微镜是利用玻璃制作的透镜对光进行折射，将一物点发出不同角度的光线最终会聚成一个像点。 电子显微镜是利用电场或磁场折射电子束，达到成像目的。 ;光 源 聚光镜 样 品 物 镜 投影镜 最终象; 镜筒内部结构示意图： 1) 照明系统： 电子枪 聚光镜 2） 样品室 3） 成象系统： 物镜 中间镜 投影镜 4） 观察记录系统： 观察室 照相机 ;;二、电子显微镜的成像系统 1、物镜 由铁壳包裹的线圈组成，是电镜成像系统的 关键性部件。在物镜中心位置同样装有精密度极高 的极靴，以及要求很高的肖像散部件，以尽量消除 成像过程中难以完全避免的像散现象，保证成像的 清晰度。在物镜的后焦面装有可动光阑片，可根据 具体情况来调整光阑孔的大小。 2、中间镜 也是由铁壳包裹的线圈组成，位于物镜和投影镜 之间，作用是将物镜所成的放大像进一步放大。目前 高档的电镜可设有三极中间镜。 3、投影镜 也是由铁壳包裹的线圈组成，作用是将以上成像进 一步放大并投影于荧光屏上，激发荧光，形成影象。;三、观察记录系统 1、荧光屏 为圆形平面结构，上面涂以荧光粉，当高速 电子撞击其表面时，便激发出荧光，从而使观察 者能通过含铅玻璃窗口直接看到影象。 2、照相室 在荧光屏的下边，装有电镜软片，通过电子 束直接轰击软片表面而使软片爆光，从而使观察 影象以底片或照片的形式保存下来。;四、真空系统 由低真空和高真空两极真空泵构成。前者称为机械泵，排气气压达0.01mmHg;后者称为扩散泵， 排气气压可达0.0001mmHg以下。 真空系统的作用是使镜筒内部获得高真空。如果镜筒内真空度较差，将会: 1）气体分子与高速电子相 互作用，随机地散射电子，降低象的反差。 2）电子枪中存在残余气体，会产生电离和放电，引起电子束发射不稳定。 3）残余产体与白灯丝发生作用，降低灯丝寿命。 4） 残余产体在样品周围会污染样品。;