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- 2021-07-07 发布于河北
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Western Blot 基本原理、过程及注意事项
原理
是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。
主要有三个过程:蛋白质电泳、转膜、检测。样品的准备
样品种类主要有培养的细胞、组织(需磨碎)、特殊细胞(切割下来的肿瘤
细胞)等。
1、 裂解液主要有 RIPA和三去污两种,RIPA适用于细胞质中蛋白检测, 而三去污适用于总蛋白。三去污又分为离子型和非离子型。离子型的裂 解能力较强如 SDS等,非离子型的包括 NP-40、Tritonx-100 。
2、 裂解液的成分,
作用 试剂
增加离子强度
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