集中实验八凝胶过滤分离高铁血红蛋白与高铁氰化钾.pptVIP

实验步骤; 装柱;装柱要求:; 层析柱稳定后接储液瓶，打开出口，用两倍于床体积的缓冲液洗脱平衡(5-10min )，不可露出床面，关闭出口; 加样; 洗脱与收集;带网孔的葡聚糖珠;用洗耳球从层析柱下口慢慢将柱中的凝胶吹至小烧杯中回收 ;将MetHb洗脱液装入透析袋; 磷酸盐的鉴定; 蛋白质的鉴定; 装柱后检查凝胶是否均匀，若有气泡或分层时，加入缓冲液搅动后静置或者重新装柱，保持柱床面平整； 洗脱时流速不可太快或太慢； 透析袋中的液体不可装满，否则会将透析袋胀破。; 磷酸盐的鉴定; 蛋白质的鉴定; MetHb的相对分子量较大，直径大于凝胶网孔被完全排阻在孔外，只能在凝胶颗粒外的空间向下流动，流程较短，移动速度快，首先流出; K3Fe(CN)6的相对分子质量较小，直径小于凝胶网孔可完全渗透进入凝胶颗粒的网孔，在向下移动过程中流程较长，移动速度慢，最后流出; 磷酸盐是小分子，小于透析袋孔径的小，能够穿过透析袋；而蛋白质是大分子，不能透过透析袋，只能保留在袋中;向凝胶柱中加入样品时，为什么必须保持胶面平整？上样体积为什么不能太大？ 请解释为什么在洗脱样品时，流速不能太快或太慢？ 圆盘电泳的分子筛效应和凝胶过滤的分子筛效应原理上有何不同？ ; 实验项目 实验原理 试剂和器材 操作方法（主要步骤） 结果分析 思考题;实验九 酶法测血清葡萄