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沙门氏菌检验标准操作规程 沙门氏菌检验标准操作规程 1 目的PURPOSE 规范888物料、产品的沙门氏菌检验操作，确保检验结果的可靠性。 2 范围SCOPE 适用于888物料、产品的沙门氏菌检验工作。 3 责任RESPONSIBILITY 微生物检验员严格执行本规程，品质部负责人监督执行。 4 程序PROCEDURE 4.1定义和原理 沙门氏菌广泛存在于动物的肠道和内脏，以及被粪便污染的水和土壤中，是细菌性食物中毒的主要病因。本方法利用沙门氏菌呈辛酸酯酶阳性，而氧化酶和脂肪酶均呈阴性的特性，对物料、产品进行沙门氏菌检验。 4.2材料和设备 4.2.1紫外灯：波长366nm，功率不小于6W。 4.2.2放大镜：3至4倍。 4.2.3毛细滴管。 4.2.4LX-B35L压力蒸汽灭菌锅。 4.2.5无菌的培养皿。 4.2.6无菌的接种环。 4.3培养基和试剂 4.3.1SCDLP液体培养基：按《化妆品卫生规范》（2021版）或使用商品培养基干粉配制。 4.3.2四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液：按GB4789.4—2021附录A.5配制或使用商品试剂。 4.3.3SS琼脂培养基（含1%蔗糖）：牛肉浸膏(或牛肉粉)5.0g，蛋白胨5.0g，乳糖10.0g，蔗糖10.0g，胆盐NO.38.5g，柠檬酸钠8.5g，硫代硫酸钠1.0g，柠檬酸铁1.0g，煌绿1.0g，中性红0.025g，琼脂13.5g，蒸馏水1000mL。 4.3.4HE琼脂培养基：按GB4789.4—2021附录A.5或使用商品培养基干粉配制。 4.3.5 玉米油维多利亚蓝琼脂培养基：灭菌后的基础培养基冷却至50℃左右，边摇边加入玉米油乳化液。倾注平皿，制成平板。基础培养基及玉米油乳化液配方如下： a）基础培养基：蛋白胨5g，酵母浸粉3g，氯化钠5g，琼脂13g，水900mL，pH7.8-8.0。将各成分加入水中，加热溶解。调节pH7.8-8.0，116℃15min高压灭菌。 b）玉米油乳化液：玉米油100mL，0.1%维多利亚蓝水溶液100mL，0.5%琼脂溶液80mL，吐温801mL。玉米油加维多利亚蓝水溶液混合，边振动边在沸水中加热溶化。然后，放入分液漏斗中，弃去蓝色水部分，再将着色的脂肪用水洗1-2次。将着色脂肪20mL加入810mL琼脂溶液中，再加1mL吐温80，116℃15min高压灭菌。冷却后用超声波乳化。 4.3.6MUCAP试剂：取MUCAP 100mg，加0.2mL纤维溶解剂溶解，再加Triton X-100 1.8mL，贮存于4℃冰箱。使用时用pH5.0的0.1mol/L醋酸盐缓冲液稀释10倍。 4.3.7氧化酶试纸：将甲液与乙液等量混合。取定性滤纸，浸透混合液后，于70-80℃烘箱烘干，剪成大小适当的纸条，密封于塑料袋或瓶中，贮存于4℃冰箱备用。 甲液：1% α-萘酚乙醇液；乙液：1% 二甲基对苯二胺草酸盐水溶液。 4.4 检验步骤 4.4.1增菌和前增菌 取样品按SOP-QM-B017制备1：10稀释的检液。取10mL加到90mLSCDLP液体培养 基中，置培养箱36℃±1℃培养18h～24h。移取10mL，转接种于100mL四硫酸钠煌绿（TTB）增菌液内，42℃±1℃培养18h～24h。 4.4.2分离培养 4.4.2.1分别用接种环取增菌液1 环，划线接种于一个SS 琼脂平板（含1%蔗糖）和一个HE琼脂平板。SS琼脂平板于36 ℃±1 ℃培养24～30h，HE平板于36 ℃±1 ℃培养40～48h。 4.4.2.2沙门氏菌菌落特征： a）在SS 琼脂平板上：无色半透明，菌落中心带黑色的菌落；或者菌落为粉红色，中心带黑色，但有时不明显。 b）在HE平板上：无色半透明，菌落中心带黑色或几乎全黑色；或者菌落呈粉红色，中心带黑色。 4.4.3MUCAP试验 4.4.3.1 从培养的分离培养基或显色培养基上挑选疑似沙门氏菌的菌落，尽量选较大、分离较好的单个菌落，用中性笔做好标记并编号。 4.4.3.2 用毛细滴管吸取MUCAP试剂，加一滴于编号的菌落上(覆盖整个菌落)。将一个平板的被检可疑菌落全部都滴加试剂后，将平板置于366nm紫外灯下检视10至15分钟。发蓝色荧光的为MUCAP试验阳性，将阳性菌落编号记录下来。 4.4.4 氧化酶试验 用接种环挑取MUCAP阳性菌落，涂于氧化酶试纸上，观察涂菌点是否变蓝色。在 10min内变蓝色为氧化酶试验阳性，不变色为阴性。 4.4.5 脂肪酶试验 将SS琼脂或HE琼脂