植物组织培养实验室的构建与操作技术.pptxVIP

主要内容 组织培养实验仪器设备及使用方法 无菌操作技术 培养基的制备方法和步骤 外植体的灭菌方法 褐变和玻璃化原因及应对措施 ;第一节　植物组织培养实验室及主要设备;;基本设备;准备室主要仪器设备：;(5)恒温水浴锅 (6)蒸馏水发生器 蒸馏水用于配制母液或培养基（普通实验可以用自来水代替蒸馏水） (7)电炉 (8)高压灭菌锅 进行培养基、水和器械用具的灭菌;(9)酸度计 测定培养基及酶制剂的pH值（普通实验可使用pH试纸） (10)烘箱 干燥洗净的玻璃器皿，也可用于干热灭菌 和测定干物重 (11)摇床 振荡培养 (12)离心机 分离培养基中的细胞以及解离细胞壁后的原生质体 ;PHS-802中文台式酸度计;不锈钢蒸馏水器（单蒸水）;２、缓冲室（注意门的朝向）;基本设备;;;;基本设备;基本设备;;;;;;;;;;;;;;;４、培养室;小型臭氧发生器;二、培养器皿及用具;第二节　培养基及其配制;一．培养基成分;１．水;２．无机盐类(inorganic element）;大量元素 指植物所需元素的浓度大于0.5mmol／L的元素，有C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S。 除C、H、O外，其它矿质元素通常以一定浓度的无机化合物形式，按一定比例配制而成，溶于水中以离子态被吸收 N有硝态氮KNO3和铵态氮(NH4)2SO4两种形式（一般NH4—N对植物生长较为有利）。 ;微量元素;3.有机化合物(organic compound) [基本培养基（只含有大量和微量元素）] 　 为使培养物的生长更好，还需添加各种有机成分：糖类、维生素、醇类、嘌呤、氨基酸等 （１）糖类（碳水化合物 ） 　　碳源，维持培养基的渗透压在1.5-4.1MPa。多使用蔗糖。 不同浓度会影响细胞的增殖分化，试管苗生长与繁殖浓度2-3%，幼胚培养4-6%，某些特殊培养中用8-10%。 细胞和原生质体培养还用麦芽糖、葡萄糖、果糖 ;（２）维生素 　　明显的促进离体培养物的生长。 盐酸硫胺素-VB1、盐酸吡哆醇-VB6、烟酸、生物素、抗坏血酸-Vc等。 一般用量为0.1～1.0mg／L。 （３）肌醇（环己六醇） 　促进胚状体和芽的形成。用量一般50-100mg/L。 （５）氨基酸 　　　常用甘氨酸和多种氨基酸混合物（水???酪蛋白、水解乳蛋白） 用量在10-1000mg／L之间。 （营养丰富，极易引起污染，如在培养中无特别需要，以不用为宜。） ;（６） 天然复合物（包括部分蛋白质水解物） 　　　其成分比较复杂，大多含氨基酸、激素、酶等一些复杂化合物。 对细胞和组织的增殖与分化有明显的促进作用，但对器官的分化作用不明显。 成分大多不清楚，一般尽量避免使用。;４、生长调节物质（植物激素）;（１）生长素类(auxin) ;IAA--天然生长素，亦可人工合成，其活力较低，是生长素中活力最弱的激素，对器官形成的副作用小，高温高压易被破坏，受光也易分解 NAA--启动能力比IAA高出3-4倍，可大批量人工合成，耐高温高压，不易被分解破坏，应用较普遍 IBA--促进发根能力较强 NAA和IBA广泛用于生根，并与细胞分裂素互作促进芽的增殖和生长。 2，4—D --启动能力比IAA高10倍，特别是促进愈伤组织的形成，同时强烈抑制芽的形成，影响器官的发育。适宜的用量范围较狭窄，过量常有毒效应;腺嘌吟的衍生物，包括6-BA、Kt、Zt 等。其中Zt活性最强，但非常昂贵，常用的是6-BA。 作用： 诱导芽的分化 促进侧芽萌发生长 促进细胞分裂与扩大（茎增粗），抑制根的分化，延缓衰老 多用于诱导不定芽的分化、芽的增殖。 ;（３）赤霉素（gibberellic acid）;激素配比模式;;No 6-BA? ;NAA increased to 5.0 mg. l-1 Profuse development of roots over the explant upper and lower surface, and few shoots. Some callus ;５．其它附加成分;二、常用培养基的种类、配方及特点;培养基的种类;MS培养基 无机盐和离子浓度较高，硝酸盐含量较其他培养基为高。 B5培养基 含有较低的铵，双子叶植物特别是木本植物许多都适于用B5。 White培养基 1963年又作了改良，称作White改良培养基。无机机盐数量较低，适于生根培养。 N6培养基 成分较简单，KNO