原核表达系统的选择和高效表达策略.pptxVIP

微生物基因工程 李刚 副教授教学内容一、PCR引物的设计与实验操作技巧；二、基因组文库的建立与筛选；三、定向进化技术在微生物酶制剂研究中 的应用；四、原核表达系统的选择和高效表达策略；五、真核表达系统的选择和高效表达策略。四、原核表达系统的选择和高效表达策略 原核生物表达系统主要包括： 大肠杆菌表达系统、枯草芽孢杆菌表达系统、链霉菌表达系统等, 其中应用最广泛的是大肠杆菌表达系统。原核表达系统的优点1、细菌培养操作简单、生长繁殖快、价格 低廉；2、外源基因表达产物的水平高( 如大肠杆菌中目的蛋白的表达量可超过细菌总蛋白量的80%) ；3、基因背景和表达特性清楚。大肠杆菌表达系统自20 世纪70 年代以来, 大肠杆菌一直是基因工程中应用最为广泛的表达系统。尤其是进入后基因组时代以来, 有关蛋白结构以及功能研究的开展, 对基因表达的要求更高,这时大肠杆菌往往是表达的第一选择。大肠杆菌表达系统的优缺点优点：大肠杆菌具有培养条件简单、生长繁殖快、安全性好、可以高效表达不同外源基因产物等特点, 是许多外源基因表达系统中最好的一种, 是目前研究最深入、发展也最完善的表达系统, 大量的有价值的多肽和蛋白质已在大肠杆菌中获得了超量表达。缺点：大肠杆菌表达体系与其他表达体系相比, 也具有一些缺点: ①高效表达易形成包涵体。②不能进行翻译后的加工修饰, 如糖基化、磷酸化及酰基化等。大肠杆菌表达系统