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笔记3(分子克隆2——主要步骤)
分子克隆可以分为以下几个步骤:
?? (1)带有目的基因的DNA片段的获得
?? (2)重组DNA分子的构建
?? (3)重组DNA分子的转化和重组克隆的筛选
?? (4)特定重组克隆的鉴别
分离制备待克隆的DNA片段————将靶DNA片段与载体在体外进行连接————重组DNA分子转入宿主细胞————筛选、鉴定阳性重组子————重组子的扩增。
1.带有目的基因的DNA片段的获得:
可以用限制内切酶降解基因组DNA,再配合使用其他实验手段得到待定的DNA片段,可以用超速离心的方法分离出具有特定核苷酸组成的DNA片段,可以用mRNA
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