糖尿病基因诊断.pptx

的;一.糖尿病的临床表现 二.辅助检查 三.糖尿病的基因诊断;;可疑指征;二.辅助检查;1999年WHO修改糖尿病标准如下： 空腹血糖(FPG)的分类： ＜6．0mmol／L为正常； ≥6．0～＜7．0mmol／L为空腹血糖过高(未达糖尿病，简称IFG)； ≥7．0mmol／L为糖尿病(需另一天再次证实)。 空腹血糖的定义是至少8小时没有热量的摄入。; 可疑糖尿病，空腹及餐后血糖增高但未达到糖尿病诊断标准者应行此试验。成人采用75g葡萄糖负荷，儿童1．75g/kg，正常人血糖高峰出现于服糖后1/2～1h，峰值不超过8．9～10mmol/L(160～180mg/dl)。 ;采用放射免疫法测定的胰岛素包括胰岛素原及与抗体结合的胰岛素。C肽测定不受胰岛素抗体影响，不与胰岛素产生交叉免疫反应，也不受外源性胰岛素干扰。1型糖尿病空腹血浆胰岛素和C肽水平很低，2型糖尿病则多为正常或增高。 ;本试验的方法与OGTT相同，只是于空腹，服糖后30，60，120，180min时采血同时测胰岛素或C肽，以直接了解胰岛β细胞的功能状态。正常人血胰岛素和C肽的高峰与血糖高峰一致，于服糖后30～60分钟胰岛素测值为空腹的5～10倍，C肽测值为空腹的5～6倍。1型糖尿病患者糖负荷后无胰岛素和C肽释放反应峰，其释放曲线呈低平状态；2型糖尿病肥胖患者，糖负荷后胰岛素和C肽释放反应峰值正常或增高，但高峰却在2h后延迟出现；病程已久消瘦2型糖尿病患者胰岛素和C肽的释放反应峰值低于正常。 ;糖基化血红蛋白(GHb)含量与血糖浓度呈正比，可反映2～3个月前体内血糖的平均水平。糖基化血红蛋白的主要成分为HbAlc，因此常以HbAlc代表GHb。GHb(或HbAlc)的测值因测定方法不同而略有差异，约在3．6%～6．3%的范围之内。未控制的糖尿病患者GHb可为正常人的2至3倍。 ;自身抗体包括胰岛细胞抗体(ICA)、胰岛素抗体(IAA)及谷氨酸脱羟酶(GAD)抗体测定。1型糖尿病患者血清中该三种抗体可同时存在，亦可仅测到1～2种。三种抗体中GAD存在的时间较长，于发病10余年后仍可测到该抗体。 ; 三.糖尿病的基因诊断;基因突变 分型;1、线粒体DNA点突变： 线粒体DNA (m tDNA ) 3243 位点tRNAL eu (UUR)基因 A →G 突变是DM 的致病基因。 2、线粒体DNA缺失突变: 10.4kb缺失(nt4398-14882);7.5kb(nt6080-13800);7.6kb(nt6465-14135) 3、线粒体DNA重复突变： Poulton等报道2例，分别为8kb（nt6000-15000）及8kb（nt7000-16000） ;二、胰岛素基因突变; Moller等对INSR基因的全部外显子筛查后发现，外显子2，3，8，9，13，17中有无义突变，外显子20中存在一个异质性点突变。 (CGG→CAG、Argl174→Gln) 该突变位于酪氨酸激酶区内，影响受体细胞内亚基的结构，是引起遗传性胰岛素抵抗（insulin resistance ，IR）的主要原因。;四、葡萄糖激酶基因突变;五、其他基因突变;糖尿病相关基因诊断技术;线粒体基因突变糖尿病—PCR技术; 用限制性内切酶Apa I 酶切PCR 反应产物。取30 μl PCR 反应产物, 再加3. 4 μl L 2Buffer 及1 μlApaé 酶(20 u∕μl) 混匀, 37℃水浴3 h, 使之充分酶解。 酶解产物用溴化乙锭染色, 然后用1. 5% 琼脂糖电泳检测, 最后在紫外灯下观察结果。;1～ 4: 突变; 5、6: 无突变; C: 正常;单链构象多态性(Single-Strand Conformation Polymorphism，SSCP);步骤： 1、PCR扩增靶DNA。 2、PCR产物的快速变性而后快速复性，形成特定空间结构的DNA单链分子。 3、非变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）。 4、PAGE胶的银染。;基因芯片（gene chip）;近日从武汉大学中南医院了解到, 该院周新教授率领的课题组新近发明的糖尿病基因诊断芯片, 可以通过基因检测在一天之内确诊线粒体型糖尿病。;基因芯片工作流程;病例;Thank you !;9、春去春又回，新桃换旧符。在那桃花盛开的地方，在这醉人芬芳的季节，愿你生活像春天一样阳光，心情像桃花一样美丽，日子像桃子一样甜蜜。12月-2012月-20Wednesday, December 30, 2020 10、人的志向通常和他们的能力成正比例。00:34:5100:34:5100:3412/30/2020 12:34:51 AM 11、夫学须志也，才须学也，非学无以广才，非志无以成学。