DNA测序仪的原理.pdf

DNA测序仪的原理 原理： （一）双脱氧链末端终止法测序原理 （二）新生链的荧光标记原理 （三）荧光标记 DNA的检测原理 （一）、Sanger 等人 : 双脱氧链末端终止法 双脱氧链末端终止法通过使用链终止剂—类似于正常 dNTP 的 2’,3 ’- 双脱氧核苷三磷酸 (ddNTP)，将延伸的 DNA链特异性地终止。 其反应体系也包括单链模板、引物、 4 种 dNTP和 DNA聚合酶。共分 四组，每组按一定比例加入一种 (ddNTP)，它能随机渗入合成的 DNA 链，一旦渗入合成即终止， 于是各种不同大小片段的末端核苷酸必定 为该种核苷酸，可以从放射自显影带上直接阅读 DNA的核苷酸序列。 与 dNTP相比， ddNTP在脱氧核糖的位置上缺少一个羟基，反应 过程中虽然可以在 DNA聚合酶作用下，通过其磷酸基团与正在延伸的 DNA链的末端脱氧核糖 -OH 发生反应，形成磷酸二酯