实验一培养基配制.pptVIP

* * 实验一培养基配制 实验一 培养基的配制及其灭菌 实验二 外植体灭菌及其初代培养物的建立 实验一 培养基配制及其灭菌 一、实验目的 了解培养基制备方法及灭菌技术。 二、实验原理 培养基是植物离体培养组织和细胞赖以生存的营养基质，是为离体培养材料提供近似生物 体内生存的营养环境。一般常用MS培养基，无机盐浓度较高，能满足组织快速生长的需 求。为减少称量的工作量和误差，一般先配制培养基的各种母液，然后按需要量加入。 三、实验材料 1、实验药品 2、实验用具 四、实验步骤 1、MS培养基母液的配制 （1）大量元素母液（母液1）N、P、 K、Ca、S、Mg （2）微量元素母液（母液2）Mn、B、Zn、Cu、Mo、Cl、Ni （3）鉄盐母液（母液3） Fe （4）有机物质母液（母液4） NAA 、6-BA 、GA3 MS培养基配制表 母液 化合物 含量（终浓度） mg/L 母液 称量（mg） 体积（ml） 吸取量 （ml/L） 1号 NH4NO3 KNO3 KH2PO4 MgSO4.7H2O CaCl2.2H2O 1650 1900 170 370 440 8250 9500 850 1850 2200 500 100 2号 ZnSO4.7H2O MnSO4.4H2O H3BO3 NaMoO4.2H2O CuSO4.5H2O CoCl2.6H2O KI 8.6 22.3 6.2 0.25 0.025 0.025 0.83 860 2230 620 25 2.5 2.5 83 1000 10 3号 Na2－EDTA FeSO4 .7H2O 37.25 27.85 372.5 278.5 100 10 4号 盐酸硫胺素VB1 盐酸吡哆醇 VB6 甘氨酸 烟酸（VB3） 肌醇 0.4 0.5 2 0.5 100 4 5 20 5 1000 100 5 2、植物生长调节物质的配制 母液 含量（终浓度） mg/L 母液 称量（mg） 体积（ml） 吸取量 （ml/L） NAA 2 2 1000 100 6-BA 20 2 100 10 GA3 10 5 500 75 配制方法： NAA：称2㎎ NAA，加少量95%酒精溶解，再加水定容至1000 ml。6-BA：称2㎎的6-BA，加少量1mol/L的NaOH溶解，再加水定容至 100 ml 。 GA3：称5 ㎎，加水定容至500ml。 3、MS固体培养基的配制、分装和灭菌 （1）取一只1L烧杯，放入约500mL蒸馏水，依次加入母液1（100mL）、母液2（10mL）、母液3 （10mL）和母液4（5mL），并不断搅拌。（本实验2L，先配1L，再配1L） （2）加入植物生长调节物质（NAA:100ml,6-BA:10ml,GA3:75ml）和30g蔗糖，待蔗糖溶解后加蒸馏水定容至1L。 （3）加入琼脂（0.6g/L），加热溶解。 （5）调整pH6.5。 （6）将培养基分装到锥形瓶中，每瓶约300mL. （7）灭菌。放入高压蒸汽灭菌锅中，121℃、0.105Pa灭菌15min。 （8）倒平板。所倒培养基约占培养皿的1/3。 五、思考题 1、培养基的各种成分在植物体内的生理作用有哪些？ 2、使用高压灭菌锅在培养基灭菌时应注意哪些问题？ *