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二. 细菌的简单染色和革兰氏染色
1. 革兰氏染色中那一步是关键?为什么?你是如何操作的?
革兰氏染色的关键步骤是:乙醇脱色(是脱色时间)。如果脱色过度,革兰氏阳性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阴性菌;如脱色时间过短,革兰氏阴性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阳性菌。脱色时间的长短还受涂片的厚薄,脱色是玻片晃动的快慢及乙醇用量的多少等因素的影响,难以严格规定(脱色是应当控制速度,脱色时间一般为20—30s)。
2. 固定的目的之一是杀死菌体,这与自然死亡的菌体有何不同?
自然死亡的菌体本身已经部分自溶,结构已经改变。固定杀死细菌时细菌结构是保持死亡时的状态的。
3. 不经复染这一步能否区分革兰氏阳性菌和阴性菌?
能。在酒精脱色后,不被酒精脱色而保留紫色者为革兰氏阳性菌(G+),被酒精脱色为革兰氏阴性菌。最后一步用番红染液复染,是为了让结果更清楚。
4. 涂片为什么要固定,固定适应注意什么问题?
a 杀死细菌并使菌体黏附与玻片上;b 增加其对染料的亲和力。
固定时应注意:手持玻片,菌膜朝上,在微火过3次(手指触摸玻片反面,不烫手为宜),固定时应尽可能维持细胞原有形态,防止细胞膨胀或收缩。
三. 霉菌、放线菌的形态观察
1. 镜检时,如何区分基内菌丝与气生菌丝?
一般气生菌丝颜色较深,直生或分枝丝状,比基内菌丝粗;而基内菌丝色浅、发亮,可看到横隔膜,继而断裂成球状或杆状小体。
2. 显微镜下细菌 放线菌 酵母菌和霉菌的主要区别是什么?
放线菌与细菌需要在油镜下才能观察清楚,而霉菌和酵母菌在低倍镜下即可看到。
细菌:为细而短的单细胞微生物(个体微小),主要形态有:球、杆、螺旋状等。(部分杆菌还可形成芽孢)
放线菌:存在分枝丝状体和菌丝体,革兰氏阳性菌,有孢子丝和孢子(球形、椭圆形、杆状、柱状)。
酵母菌:单细胞,菌体呈圆球、卵形或椭圆形,少数呈柠檬形、尖形等。菌体比细菌大几倍到几十倍,部分处于出芽繁殖过程中菌体还可观察到芽体,大多数菌体上还有芽痕。
霉菌:菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多,常是细菌菌体宽度的几倍到几十倍,在低倍镜下即可看到,并还可看到孢子囊梗、囊轴、孢子囊、包囊孢子等。
四. 玻璃器皿的洗涤、包扎与灭菌
1. 高压蒸汽灭菌开始时为什么要将锅内排尽?灭菌后为什么要待压力降低到“0”
因为空气的膨胀压大于水蒸汽的膨胀压,所以,当水蒸汽中含有空气时,在同一压力下,含空气蒸汽的温度低于饱和蒸汽的温度。如果压力未降到0时,打开排气阀,就会因锅内压力突然下降,使容器内的培养基由于内外压力不平衡(压力突然下降而发生复沸腾)而冲出烧瓶口或试管口,造成培养基等液体沾湿棉塞或溢出等事故。
2. 设计实验方案,比较干热灭菌和湿热灭菌的效果。
以下试验方案有关操作均遵循无菌操作条件和等量原则。
实验材料
试管 镊子 酒精灯 嗜热脂肪芽孢杆菌 ATCC 7053 菌片 纸片(与菌片同大小 同材料) 溴甲酚紫蛋白冻水培养基(已灭菌)等实验材料(材料有余)。
对照组
取9支洁净试管,分为A1 B1 C1 三组(每3支一组),将A1 组中放入菌片,B1 组中放入纸片,C1组中什么也不加;不经灭菌,直接加入溴甲酚紫蛋白冻水培养基(等量)。
恒为培养
将上述所有试管按分组在56℃
3. 为什么干热灭菌比湿热灭菌所需温度高 时间长?
在湿热条件下,有水蒸汽的作用:
a高温水蒸汽导热比干空气要快;
b高温水蒸汽冷凝变水时有放热过程;
c高温水蒸汽能穿透细菌的细胞膜,直接进入细胞内破坏细胞;
c高温水蒸汽能水解一部分细胞结构,加速导热。
(湿热中细菌菌体吸收水分,蛋白质较易凝固,因蛋白质含水量增加,所需凝固温度降低;湿热的穿透力比干热大;湿热的蒸汽有潜热存在,每1克水在100℃时,由气态变为液态时可放出2.26kJ(千焦)的热量。这种潜热,能迅速提高被灭菌物体的温度,从而增加灭菌效力。
五. 培养基的配置
1. 配制牛肉膏蛋白胨培养基,有哪些操作步骤?那几步易出错,如何防止?
称取药品—加热溶化—分装—加棉塞—包扎—灭菌—搁置斜面
易出错的步骤有:
a 称取药品 称取时钥匙专用,瓶盖不要错盖,易吸水的药品要快速称取;
b 加热溶化 加入药品后要用玻璃棒不停搅拌,以免糊底(在琼脂熔化过程中,应控制火力,以免培养基因沸腾而溢出容器,同时,需不断搅拌,以防琼脂糊底烧焦。);
c 分装 分装时培养基不能粘在三角瓶(或试管)口,以免接种时染菌;
d 搁置斜面 斜面长度约试管长度一半为宜。
2. 配制培养基的一般原则是什么?
a 目的明确b 营养协调c 理化适宜d 经济节约
六. 平板菌落计数法
1. 平板菌落计数法的原理是什么? 它适用于那些微生物的计数?
平板菌落计数法是将等测样品经适当稀释后,其中的微生物充分分散为单个细胞,取一定
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