体外受精兽医外科手术学.pdfVIP

基于配子及胚胎的繁殖控制技术 体外受精技术 Louise Joy Brown 1978 Nobel Prize Robert Geoffrey Edwards 2010 基于配子及胚胎的繁殖控制技术 卵母细胞的采集 离体采集 卵泡抽吸法：速度快、不易污染，但易影响卵丘细胞，影响成熟 卵巢解剖法：回收率高、卵丘细胞完整，但速度慢、易污染 活体采集 腹腔镜法：直观、已掌握、但工作量大，对动物有损伤，不易频繁手术 B型超声波法：操作快，不手术，可以反复采集，胆设备昂贵，不易掌握 母牛每周采集2次，每次获得5-6枚卵母细胞 。活体采卵获得的卵母 细胞质量较差，可以在采集前用激素处理来提高采集效果。 基于配子及胚胎的繁殖控制技术 卵母细胞的成熟 :恢复减数分裂，为受精和胚胎发育做准备 核成熟：和膜破裂，生发泡破裂 （GVBD） 胞质成熟: 生发泡期到MII期，RNA和蛋白质积累 体外成熟环境 培养液：基础液+激素+细胞因子+抗生素 培养时间：22-24h;猪40-44h ；马30-36h 培养环境：38-39℃, 需要CO 维持酸碱平衡 2 体外成熟系统：开放式，微滴，密闭系统 成熟环境质量评定 形态：胞质均匀、没有空泡、卵丘扩张、卵周隙具有第一极体 固定染色、细胞器分布情况、基因表达、受精和胚胎发育潜力 BCL-X, Bax 基于配子及胚胎的繁殖控制技术 影响成熟因素 动物种类、动物年龄、动物生产性能、卵泡大小及形态、卵母细 胞形态、卵巢储存时间和温度、卵泡细胞、激素、添加物 精子的准备 纯化：悬浮法、过滤法、离心法 获能：精子被膜蛋白脱落。 钙离子载体、肝素、血清白蛋白、高钙离子溶液等 获能判定 形态和运动方式：头部膨大，运动加快 染色、钙离子水平 受精系统 微滴法、四孔板培养法 受精判定：染色法 （原核）；卵裂率 基于配子及胚胎的繁殖控制技术 影响体外受精因素 受精液及其成分 （TALP）:无机盐离子组成 精子来源、精卵比例、温度、气相环境、孵育时 （24h以内）、细胞因子等 单精显微注射 （ICSI） 意义：提高珍贵品种精子的利用率 提高成熟卵母细胞的利用率 解决无精和少精雄性动物的生殖问题 简化转基因方法 基于配子及胚胎的繁殖控制技术 早期胚胎的体外培养 体外胚胎发育阻断：人4-8ce lls;小鼠2ce lls;牛羊8-16ce lls 培养液成分：无机盐、能量底物、氨基酸、维生素、蛋白质、激素、生长因子 培养系统：微滴或培养板、输卵管、与体细胞共培养 影响因素：温度、气相环境、培养液体积与胚胎数量比率 问题与对策：改良培养液、分段培养