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乌蕨不同部位总黄酮分析论文 乌蕨［Stenolomachusanum(L.)Ching］为鳞始蕨科植物乌蕨的全草，又名野鸡尾、金花草、中华金粉蕨，具有清热、解毒、利湿、止血的功效［1］。本文就乌蕨全草、根、茎、叶等不同部位的总黄酮和微量元素含量进行比较分析，为乌蕨的进一步研究和资源开发提供依据。 1仪器与试药 1.1仪器 WND200A型高速中药粉碎机（上海微型电机厂），BS224S精密电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)，TU1900双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限公司），IRIS/AP型电感耦合等离子体发射光谱仪(美国TJA公司)，全自动回流消化仪(重庆南岸玻璃仪器厂)。 1.2试药 芦丁标准品(中国药品生物制品检定所，批号为0080-9705)；硝酸、高氯酸均为优级纯，其他试剂均为分析纯，测微量元素用水为双蒸水。乌蕨药材于2008年10月采于杭州九溪，经熊耀康教授鉴定为乌蕨Stenolomachusanum(L.)Ching的地上部分，阴干，粉碎，备用。 2实验方法与结果 2.1总黄酮含量测定［4］ 2.1.1对照品溶液的制备：精密称取105℃干燥恒重的芦丁对照品16.50mg，加60%乙醇溶解定容于50ml容量瓶，得浓度为0.33mg/ml对照品溶液，备用。 2.1.2供试品溶液的制备：定量称取乌蕨干燥粗粉5.0g，加16倍量0.1％HCl-60％乙醇回流提取4h，提取1次，提取液减压浓缩，加60%乙醇定容至25ml，作为供试品溶液备用。 2.1.3标准曲线的制作：精密吸取标准品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0ml，分别置25ml容量瓶中，加入5%NaNO21.0ml，摇匀，放置6min后加入10%Al(NO3)31.0ml，摇匀，放置6min后加入4%NaOH10ml，再加60%乙醇稀释至刻度，混匀，静置15min，于510nm处，以相应试剂作空白，测定吸光度，以芦丁浓度为纵坐标，以吸光度值为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程：Y=2.778X-0.0775（r=0.9991），结果表明芦丁在0.016～0.99mg范围内呈良好的线性关系。 2.1.4精密度实验：取芦丁对照品溶液2.0ml，置25ml容量瓶中，按“2.1.3”项操作，平行测定5次，结果其RSD为0.21％，表明精密度良好。 2.1.5重复性实验：取同1份样品溶液5份，分别按“2.1.3”项操作，结果RSD为0.72%。 2.1.6稳定性实验：取1份样品溶液，按上述实验方法在显色完全后0、10、20、30、45、60min分别测定吸光度，结果RSD为1.08%。实验表明：供试品溶液在1.0h内稳定的。 2.1.7加样回收率实验：取已知总黄酮含量的乌蕨样品6份，分别精密添加已知浓度的芦丁对照品适量。按供试品溶液制备方法制备，按“2.1.3”项操作，测定总黄酮含量，计算测定回收率，结果平均回收率为99.34％，RSD为1.82％。 2.1.8乌蕨不同部位总黄酮含量的测定：精密吸取提取液适量，按“2.1.3”项操作，测定吸光度A，结果见表1。表1乌蕨根、茎、叶、全草等不同部位总黄酮含量测定结果（略） 2.2微量元素含量的测定［5］ 2.2.1供试品溶液的制备：各取药材约0.5g，精密称定，置50ml凯氏烧瓶，加8.0ml消化液［V(HNO3)∶V(HClO4)=4∶1］，静置过夜，加热回流消化至无色透明，冷却后，定量转移至100mL容量瓶中，加超纯水稀释至刻度，摇匀，备用。取相同体积的消化液，同法消化，制备空白溶液。 2.2.2混合标准溶液的制备：分别取各重金属元素标准品溶液适量，用5%硝酸溶液制成混合溶液，梯度稀释，作为混合标准品溶液备用。 2.2.3测定方法：仪器工作参数：检测器CID的低波段（＜265nm）积分时间：15s；高波段（＞265nm）积分时间：5s；进样蠕动泵转速：100r/min；进样雾化器氩气压力：28psi；辅助气流量：1.0L/min；高频发生器功率：1500W；样品冲洗时间：5s；测定波长范围：193.7～407.7nm。 依次将仪器的进样管插入各个浓度的混合标准品溶液中进行测定，以每一浓度测得的3次读数的平均值为纵坐标，相应元素标准溶液浓度为横坐标，作标准曲线，并进行方法学考察。由各元素的标准曲线计算微量元素的含量，测定结果见表2。表2乌蕨根、茎、全草、叶等不同部位微量元素含量测定结果（略） 3讨论 3.1由实验可知，乌蕨全草、根、茎、叶等不同部位总黄酮含量分别1