免疫组织化学常见问题和解决方法.pdfVIP

免疫组织化学常见问题和解决方法 免疫组织化学技术又称免疫细胞化学技术，是指用标记的特异性抗体在组 织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、 定位、定量测定的一项免疫检测方法。它把免疫反应的特异性、组织化学的可 见性和分子生物技术的敏感性等巧妙结合，借助显微镜的显像和放大作用，在 细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质（如蛋白质、多肽、酶、激素、病原体以 及受体等），是单一的静止的形态学描述，上升到结构、功能和代谢为一体的动 态观察，为疾病的诊断、鉴别诊断和发病机制的研究提供了强有力的手段。 然而，要想得到一张高质量的免疫组化染色切片也并非易事。由于切片制 作和免疫组化染色过程均存在很多步骤或环节，每一个步骤或环节都需要操作 者严格控制实验条件，否则可能会影响到最终结果。现就试验中遇到得常见问 题进行分析总结，给进一步给出解决方案，希望能为帮助相关实验人员提供实 验成功率。 表1.免疫组织化学实验中的常见问题及其解决方法 出现的问题 可能的原因 处理方法 1.染色阴性 试剂失效 重新试验，设立阳性对照 漏加试剂 试剂加入顺序颠倒 组织中无目的抗原表达或表达 查阅文献或数据库，确定组织 量太低 中确有目的蛋白强表达。设立 阳性对照片，以验证实验结果 一抗与二抗种属不匹配 仔细确定一抗与二抗种属无 误，如果一抗来源于兔，则二 抗需选择抗兔二抗， 了解一抗的类型，如果一抗是 小鼠IgG1，那么二抗应选择抗 小鼠IgG1。 抗体不足 提供抗体量，延长孵育时间， 如4度反应过夜。 组织未进行抗原修复 有些组织需要经过抗原修复才 能检测抗原表达 在固定和包埋过程中，抗原变 采用多种抗原恢复方法 形导致表位变化 包埋是控制温度在58度或低 于58度 冲洗液与反应试剂不匹配 调整溶液PH值，注意过氧化物 酶底物匹配的溶液中不应含有 叠氮钠 2.染色弱 抗体浓度过低 提高抗体浓度，孵育时间不能 少于60分钟