水稻的蛋白质、核酸提取分析综合大实验.pdf

水稻的蛋白质、核酸提取分析 前言： 水稻是全世界最重要的粮食作物之一， 其栽培面积和总产量仅次于小麦。 我国是 稻谷生产的大国。近年来水稻播种面积为世界第二，产量稳居第一。由于亚洲 30 多亿人口 中 4/5 及非洲和拉丁美洲近 30 亿人口中 1/3 均以稻米为主要食物来源，所以水稻生产对发 展中国家的重要性尤为突出。 我国目前还是一个农业大国， 搞好水稻的种植和研究对于国计 民生具有重大意义。 一、实验目的： 1、掌握水稻的催芽技术； 2、掌握水稻的蛋白质、核酸提取分析技术； 3、加深对生物大分子提取分离技术、分光光度技术、凝胶电泳技术、高速离心分离技 术的理解和运用。 4、掌握 PCR、蛋白质印迹、 SDS等分子生物实验技术。 二、实验材料：水稻 三、综合大实验模块及流程图： 1. 水稻材料准备 2.2 SDS-聚丙烯 2.3 水稻 DNA提取 2.1 水稻过氧化 酰胺凝胶电泳分 分析及聚合酶链 物同工酶的电泳 析水稻种子蛋白 式反应扩增水稻 分析 质 PsbA-trnH 片段 3. 结果分析、讨论， 书写实习报告 四、实验时间安排计划： （一）第一周 周一：查阅资料，药品准备、水稻的选种、浸种； 周二：查阅资料，药品准备、稻种消毒；稻种破胸、培养；记录； 周三 : 实验讲解、药品准备，水稻过氧化物同工酶的电泳 周四 : 水稻过氧化物同工酶的聚丙烯酰胺凝胶电泳分析 ; 周五 : 水稻种子蛋白质 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析 （二）第二周 周一：水稻 DNA 提取及聚合酶链式反应扩增 PsbA-trnH 片段； 周二： Western-blot 检测人类 TES 蛋白在大肠杆菌中的诱导表达； 周三：数据整理、结果分析、讨论，书写实习报告。 1. 水稻的催芽培养 一、 实验目的： 掌握水稻种子的浸种、消毒和催芽技术，以及实验室条件下水稻幼苗的培养方法。 二、 实验原理： 水稻种子萌发需要的基本条件是种子活力、 水分、 温度和空气， 对于处在非休眠期的种 子来说，满足以上条件，就可以萌发生长。 水稻种子常带有稻粒黑粉病、恶苗病、胡麻斑病、绵腐病和稻瘟病等病菌。因此，进行 稻种消毒处理， 是防止病菌侵入， 减轻水稻病害发生的重要措施。 三氯异氰尿酸是一种高效、 广谱、低毒、安全的消毒剂。为白色结晶性粉末，含有效氯 80～ 85%，具有氯臭味，在水中 分解成异氰尿酸和次氯酸， 次氯酸扩散到细菌表面， 并穿透细胞膜直接氧化菌体蛋白， 从而 消灭病原微生物，是一种极强的氧化剂，对细菌、病毒、真菌、芽孢有较强的杀灭作用。 三、器材与试剂： 1、器材：恒温水箱、培养皿、恒温光照培养箱、 500ml 烧杯、玻棒、消毒脱脂棉 2、试剂：