流式细胞仪临床应用手册.pdfVIP

目 录 第一部分流式细胞术简介 1 流式细胞术定义 流式细胞仪是集激光技术、 电子物理技术、 光电测量技术、 计算机技术以及 细胞荧光化学技术、 单克隆抗体技术为一体的新型高科技仪器， 为生物医学与临 床检验学发展提供了最强有力的工具。 流式细胞分析技术 (flowcytometry ，FCM)又称流式细胞术， 是20世纪 70年代 发展起来的一种快速、 准确、客观的检测技术， 它能够同时检测快速直线流动状 态中的单个细胞或微球的多项物理及生物学特性 -- 在极短的时间内高速分析上 万个甚至是几十万个细胞， 并能同时从一个细胞中测得多个参数， 对其加以定性 定量分析， 还可以对特定群体加以分选。 目前，流式细胞术已经广泛用于临床应 用与基础研究， 在免疫学、 遗传学、 血液学、 肿瘤学、 细胞生物学、 细胞遗传学、 生物化学等医学与生命科学所有领域内发挥着重要的作用。 2 流式细胞仪工作原理 制备成单细胞悬液的标本或单个微粒在上样前进行荧光染色。 流式细胞仪检 测到上样管后， 产生一定的气体压力将待测样本压入流动池。 同时鞘液 （不含细 胞或微粒的缓冲液） 在仪器产生的高压作用下从鞘液管喷出， 鞘液管入口方向与 样本流形成一定的角度，形成一个圆形的鞘液流，包围着细胞或微粒高速流动， 使待测细胞在鞘液的包裹下单行排列， 逐个地通过流式细胞仪的激光聚焦区 （流 动池），从而被检测到，并发出散射光及荧光等多种光学信号。光学信号通过光 电信号转换器及电子信号处理系统采集及分析后， 最后以图形的形式将数据结果 显示在电脑屏幕上。 3流式细胞仪的主要结构 光学系统，液流系统，信号处理及放大系统，计算机系统。 4流式细胞仪检测信号 散射光信号： FSSS 荧光信号： FL1FL2FL3FL4… 5流式结果数据分析 单参数直方图分析 双参数点图分析 双参数点图分析 双参数等高图分析 双参数密度图分析 三维图分析 6流式细胞仪检测样品 可用于流式细胞仪检测的样本种类多样，包括各种细胞（如外周血、骨髓、 细针穿刺、灌洗液、实体组织、悬浮或贴壁培养的细胞），微生物，人工合成微 球等；血清、血浆、培养上清、细胞裂解液等。 如果检测样本为实体组织时，我们可以用物理化学（天然，机械研磨 / 消化） 5 7 等方法将其制备成单细胞悬液 5×10 －1×10 cells/ml ，并在上机前用 300 目筛网 过滤。 7流式细胞仪检测范围 细胞结构 细胞功能 细胞大小 细胞表面 / 胞浆/ 核的特异性抗原 细胞颗粒度 细胞活性 细胞表面面积 细胞内 / 外细胞因子 核浆比例 酶活性 DNA含量和细胞周期 激素结合位点 RNA含量、蛋白质含量